岗梅茎水提物中酚类成分的结构鉴定 本文关键词：岗梅，鉴定，成分，结构，茎水提物中酚类
岗梅茎水提物中酚类成分的结构鉴定 本文简介：摘要：综合运用多种色谱技术从岗梅茎的水提物中分离得到了18个酚类成分，经波谱学方法鉴定其结构，包括2个木脂素类（1,2），5个苯丙素类（3~7），6个绿原酸类（8~13），5个苯甲酸类似物（14~18），其中3~7,9,11,13,14,17,18为首次从冬青属中分离得到，2,8,10,15,16为
岗梅茎水提物中酚类成分的结构鉴定 本文内容：
摘要：综合运用多种色谱技术从岗梅茎的水提物中分离得到了18个酚类成分，经波谱学方法鉴定其结构，包括2个木脂素类（1, 2），5个苯丙素类（3~7），6个绿原酸类（8~13），5个苯甲酸类似物（14~18），其中3~7, 9, 11, 13, 14, 17, 18为首次从冬青属中分离得到，2, 8, 10, 15, 16为首次从岗梅中分离得到。抗炎活性筛选结果显示，8, 9, 11, 13, 15对RAW264.7细胞中的NO生成显示有一定的抑制作用，其IC50为51.1~85.8 μmol﹒L-1.本研究为进一步阐明岗梅茎的抗炎药效物质及药材的质量评价研究提供了参考。
关键词：岗梅； 冬青属； 冬青科； 酚类成分； 抗炎活性；
岗梅为冬青属植物梅叶冬青Ilex asprella （Hook. et. Arn.） Champ. ex Benth.的干燥根及茎，其性凉、味苦，归肺、脾、胃经，具有清热解毒、生津止渴、利咽消肿、散瘀止痛之功效，临床上用于治疗风热感冒、急慢性咽喉炎、肺热咳嗽、咽喉肿痛、跌打瘀痈等病症。除了入药外，岗梅也作为凉茶饮品的原料使用，因此市场需求量大，致使野生资源日渐紧缺。当前一方面正大力人工种植，另一方面也基于部分省区的传统用法，将岗梅茎与根一同入药使用。然而有关岗梅茎的研究很少[1].
课题组观察了岗梅根和茎的镇痛抗炎作用，发现茎的水提液与根一样具有显着的抗炎效果，作用机制与经由NF-κB, JAK2/STAT3和MAPK通路下调组织细胞中的TNF-α， IL-6, IL-1β炎症因子水平相关[2].同时也对岗梅茎的化学成分展开了探索，分离鉴定了三萜皂苷、木脂素、酚酸等化合物[3-5].本课题作为其中一部分，继续对岗梅茎中的成分进行研究，从茎的水提物中分离得到了18个成分，利用多种波普学方法鉴定了其结构，包括2个木脂素类 （7S,8R）-dihydro-3-hydroxy-8-hydroxy-methyl-7-（4-hydroxy-3-methoxyph-enyl）-1-benzofuranpropanol （1）和（7SR）-4,9,9'-trihydroxy-3,3?,5-trimethoxy-4?,7-epoxy-8,5?-neo-lignan4-O-β-D-glucopyranoside （2）；5个苯丙素类xylocoside A （3）、7-O-ethylguaiacylglycerol （4）、threo-3-（4-hydroxy-3,5-dimetho-xyphenyl）-3-ethoxypropane-1,2-diol （5）、2,3-dihydroxy-1-（4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl）-1-propanone （6）、foveospirolide （7）；6个绿原酸类3,4-二咖啡酰基奎宁酸甲酯（8）、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸乙酯（9）、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸甲酯（10）、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸乙酯（11）、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸甲酯（12）、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸乙酯（13）；5个苯甲酸类似物syringicacid-4-O-α-L-rhamnopyranoside （14）、原儿茶醛（15）、香草酸 （16）、3-甲氧基-4,5-二羟基苯甲酸（17）、4,5-dihydroxy-3-methoxyacet-ophenone（18），其中3~7, 9, 11, 13, 14, 17, 18为首次从冬青属中分离得到，2, 8, 10, 15, 16为首次从岗梅中分离得到。同时筛选了体外抗炎活性，结果显示，化合物8, 9, 11, 13, 15对RAW264.7细胞中的NO生成显示有一定的抑制作用，IC50值为51.1~85.8 μmol﹒L-1.
1 材料
1.1 药材
药材于2016年9月采收于广东省梅州市平原县仁居镇华润三九青草湖种植基地，经北京中医药大学中药学院张媛副教授鉴定为梅叶冬青I. asprella的茎，药材标本 （2016GM0802） 存放于北京中医药大学中药现代研究中心。
1.2 细胞
小鼠巨噬细胞RAW 264.7细胞系购自上海细胞所。
1.3 仪器和试剂
Varian Inova-500型核磁共振仪；LCMS-IT-TOF系统（Shimadzu, 日本）；制备型高效液相色谱仪（Waters）；半制备色谱柱Reprosil-Pur Basic C18 （10 mm× 250 mm, 5 μm） Sephadex LH-20 （Pharmacia）；旋转蒸发仪（Buchi, 瑞士）；ODS （40~63 μm, Merck,德国）；HP-20大孔树脂（DIAION, 日本）；柱色谱硅胶（200~300目）及薄层色谱硅胶板GF254（青岛海洋化工厂）；提取和分离中所用化学试剂均为分析纯（北京化工厂）；SANYO MCO-18AIC细胞培养箱（三洋， 日本）；OptiMair超净工作台（ESCO, 新加坡）；瑞士TECAN M1000型多功能酶标仪；DMEM培养基（Hyclone, 美国）；胎牛血清（Gibco, 美国）；NO试剂盒（北京普利莱基因技术有限公司）；阳性对照为地塞米松（Sigma, 美国）。
2 提取与分离
称取98 kg岗梅茎干品，用流动水冲洗岗梅茎，洗净泥沙；600 L水浸泡30 min,加热煮沸2 h,过滤煎煮液；600 L水加热煮沸2 h,300目滤布过滤煎煮液；合并煎煮液，滤过，70~80 ℃条件下滤液浓缩干燥至干浸膏4.0 kg.得率4.11%.
95%乙醇洗脱部位（1.6 kg） 经硅胶柱色谱分离，经二氯甲烷-甲醇（10:1~0:1） 梯度洗脱，相似洗脱部分合并后，共得到12份洗脱段（I~XII）。流分II采用硅胶柱色谱依次以乙酸乙酯-甲醇-0.5%甲酸（30:1:0.05~0:1:0.05），洗脱，得到6个小流分（II1~II6）。II2经制备HPLC （甲醇-水-甲酸， 30:70:0.1, 3.0 mL﹒min-1）得到15 （tR = 19.26 min, 11.7 mg）和16 （tR = 20.64 min, 13.7 mg）。II3经Sephadex LH-20 （甲醇）、正相硅胶色谱柱和ODS柱色谱分离得到5个流分 （II3A~II3E）。II3A 结晶得到化合物6 （19.7 mg）。II3B经正相硅胶色谱柱，依次用二氯甲烷-甲醇-0.5%甲酸（50:1:0.05~0:1:0.05）洗脱得到7个子流分（III3B1~II3B7）。II3B5经HPLC制备（乙腈-水-甲酸， 20:80:0.1, 3.0 mL﹒min-1）得到化合物4 （tR = 8.12 min, 2.5 mg）和5 （tR = 8.33 min, 5.8 mg）。
流分III采用硅胶柱色谱依次以乙酸乙酯-甲醇-0.5%甲酸（30:1:0.05~0:1:0.05），洗脱，得到13个小流分（III1–III13）。因III2与III3有交叉，故将二者合并统一为III2,并经Sephadex LH-20 （甲醇）洗脱得到8个流分（III2A~III2H）。III2D经正相硅胶色谱柱，依次用石油醚-乙酸乙酯-0.5%甲酸（3:1:0.05~0:1:0.05）洗脱得到8个子流分，其中III2D7经HPLC （甲醇-水-甲酸， 40:60:0.1, 6.0 mL﹒min-1）得到化合物1 （tR = 28.7 min, 3.0 mg），III2D8经HPLC （甲醇-水-甲酸， 25:75:0.1, 3.0 mL﹒min-1）得到化合物7 （tR = 23.51 min, 4.3 mg）和14 （tR = 68.68 min, 5.7 mg）。III2E经HPLC （甲醇-水-甲酸， 25:75:0.1, 3.0 mL﹒min-1）得到化合物17 （tR = 20.2 min, 5.2 mg）和18 （tR = 23.5 min, 2.4 mg）。III2G经HPLC制备（乙腈-水-甲酸， 25:75:0.1, 3.0 mL﹒min-1）得到化合物10 （tR = 12.74 min, 5.4 mg）， 12 （tR = 17.15 min, 4.2 mg）， 8 （tR = 18.95 min, 5.7 mg）， 11 （tR = 19.94 min, 3.9 mg）， 13 （tR = 25.22 min, 10.0 mg）和9 （tR = 30.96 min, 19.6 mg）。
流分IV采用硅胶柱色谱依次以乙酸乙酯-甲醇-1%纯水-0.5%甲酸（10:1:1:0.05~0:1:1:0.05, v/v），洗脱，得到12个小流分（IV1~IV12）。IV6经Sephadex LH-20 （甲醇）和正相硅胶洗脱，得到4个小流分（IV6A~IV6D）。IV6C经HPLC制备（甲醇-水-甲酸， 35:65:0.1, 6.0 mL﹒min-1）得到化合物3 （tR = 14.15 min, 5.3 mg）和2 （tR = 71.35 min, 23 mg）。
3 结构鉴定
化合物 1 白色粉末； ESI-MS m/z 345 [M – H]–； 1H-NMR （CD3OD, 500 MHz） δ： 6.99 （1H, d, J = 1.5 Hz, H-2）， 6.86 （1H, dd, J = 1.5, 8.5 Hz, H-6）， 6.78 （1H, d, J = 8.5 Hz, H-5）， 6.62 （1H, brs, H-2?）， 6.58 （1H, br s, H-6?）， 5.50 （1H, d, J = 6.5 Hz, H-7）， 3.88 （1H, m, H-9a）， 3.83 （3H, s, H-3-OMe）， 3.76 （1H, dd, J = 7.5, 11.0 Hz, H-9b）， 3.57 （2H, t, J = 6.5 Hz, H-9?）， 3.46 （1H, m, H-8）， 2.57 （2H, t, J = 7.5 Hz, H-7?）， 1.80 （2H, m, H-8?）； 13C-NMR （CD3OD, 125 MHz） δ： 149.1 （C-3）， 147.4 （C-4）， 146.5 （C-4?）， 141.9 （C-3?）， 136.7 （C-1?）， 135.1 （C-5?）， 129.8 （C-1）， 119.7 （C-6）， 117.0 （C-6?）， 116.7 （C-2?）， 116.1 （C-5）， 110.6 （C-2）， 88.7 （C-7）， 65.2 （C-9）， 62.3 （C-9?）， 56.4 （C-3-OMe）， 55.8 （C-8）， 35.8 （C-8?）， 32.7 （C-7?）。以上数据与文献[6]相比较，故鉴定为（7S,8R）-dihydro-3-hydroxy-8-hydroxy-methyl-7-（4-hydroxy-3-methoxyphenyl）-1-benzofuranpropanol.
化合物2 白色粉末； ESI-MS m/z 575 [M + Na]+; 1H-NMR （CD3OD, 500 MHz） δ： 6.75 （3H, s, H-2, 2', 6）， 6.72 （1H, s, H-6‘）， 5.57 （1H, d, J = 6.0 Hz, H-7）， 3.88 （3H, s, H-3'-OMe）， 3.86~3.90 （1H, m, H-9a）， 3.82 （6H, s, H-3, 5-OMe）， 3.76~3.80 （2H, m, H-9b, H-glc-6a）， 3.65~3.69 （1H, m, H-glc-6b）， 3.57 （2H, t, J = 6.5 Hz, H-9?）， 3.41~3.49 （4H, m, H-8, H-glc-2~4）， 3.21 （1H, m, H-glc-5）， 2.63 （2H, t, J = 7.5 Hz, H-7?）， 1.82 （2H, m, H-8?）； 13C-NMR （CD3OD, 125 MHz） δ： 154.4 （C-3, 5）， 147.4 （C-4?）， 145.2 （C-3?）， 140.3 （C-1）， 137.2 （C-1?）， 135.6 （C-4）， 129.4 （C-5?）， 117.9 （C-6?）， 114.2 （C-2?）， 104.4 （C-2, 6）， 105.2 （C-glc-1）， 88.5 （C-7）， 78.3 （C-glc-5）， 77.8 （C-glc-3）， 75.7 （C-glc-2）， 71.4 （C-glc-4）， 65.1 （C-9）， 62.5 （C-glc-6）， 62.2 （C-9?）， 57.0 （C-3, 5-OMe）， 56.8 （C-3?-OMe）， 55.7 （C-8）， 35.8 （C-8?）， 32.9 （C-7?）。以上数据与文献[7]相比较，鉴定为（7S,8R）-4,9,9?-trihydroxy-3,3?,5-trimethoxy-4?,7-epoxy-8,5?-neolignan4-O-β-D-glucopyranoside.
化合物 3 白色粉末； ESI-MS m/z 413 [M + Na]+; 1H-NMR （CD3OD, 500 MHz） δ： 6.54 （2H, s, H-2, 6）， 4.27 （1H, d, J = 8.0 Hz, H-glc-1）， 3.96~3.98 （1H, m, H-8）， 3.92 （1H, dd, J = 3.5 10.5 Hz, H-9a）， 3.85 （1H, m, H-glc-6a）， 3.83 （6H, s, H-3, 5-OMe）， 3.65 （1H, dd, J = 5.0, 12.0 Hz, H-glc-6b）， 3.41 （1H, dd, J = 7.0, 10.5 Hz, H-9b）， 3.37 （1H, t, H-glc-3）， 3.24~3.28 （3H, m, H-glc-2, 4, 5）， 2.76 （1H, dd, J = 6.5, 13.5 Hz, H-7a）， 2.69 （1H, dd, J = 6.5, 13.5 Hz, H-7b）； 13C-NMR （CD3OD, 125 MHz） δ： 149.1 （C-3, 5）， 135.1 （C-4）， 130.5 （C-1）， 107.7 （C-2, 6）， 104.9 （C-glc-1）， 77.9 （C-glc-3, 5）， 75.2 （C-glc-2）， 74.5 （C-9）， 73.1 （C-8）， 71.6 （C-glc-4）， 62.6 （C-glc-6）， 56.7 （C-3, 5-OMe）， 40.8 （C-7）。以上数据与文献[8]相比较，故鉴定为xylocoside A.
化合物 4 白色粉末； ESI-MS m/z 243 [M + H]+; 1H-NMR （CD3OD, 500 MHz） δ： 6.95 （1H, s, H-2）， 6.77 （2H, m, H-5, 6）， 4.19 （1H, d, J = 6.5 Hz, H-7）， 3.87 （3H, s, H-3-OMe）， 3.72 （1H, m, H-8）， 3.67~3.69 （1H, dd, J = 4.0, 11.0 Hz, H-9a）， 3.56~3.60 （1H, dd, J = 6.5, 11.0 Hz H-9b）， 3.34~3.42 （2H, m, H-1?）， 1.16 （3H, t, J = 7.0 Hz, H-2?）； 13C-NMR （CD3OD, 125 MHz） δ：148.9 （C-3）， 147.2 （C-4）， 132.1 （C-1）， 121.9 （C-6）， 115.8 （C-5）， 112.3 （C-2）， 83.8 （C-7）， 76.3 （C-8）， 65.3 （C-1?）， 64.4 （C-9）， 56.4 （C-3-OMe）， 15.6 （C-2’）。以上数据与文献[9]相比较，鉴定化合物为7-O-ethylguaiacylglycerol.
化合物 5 白色粉末； ESI-MS m/z 273 [M + H]+; 1H-NMR （CD3OD, 500 MHz） δ： 6.65 （2H, s, H-2, 6）， 4.19 （1H, d, J = 6.5 Hz, H-7）， 3.86 （6H, s, H-3, 5-OMe）， 3.72 （1H, m, H-8）， 3.67~3.71 （1H, m, H-9a）， 3.57~3.61 （1H, dd, J = 6.5, 11.0 Hz, H-9b）， 3.34~3.43 （2H, m, H-1?）， 1.17 （3H, t, J = 7.0 Hz, H-2?）； 13C NMR （CD3OD, 125 MHz） δ： 149.1 （C-3, 5）， 136.2 （C-4）， 131.3 （C-1）， 106.1 （C-2, 6）， 84.1 （C-7）， 76.2 （C-8）， 65.3 （C-1?）， 64.4 （C-9）， 56.7 （C-3, 5-OMe）， 15.6 （C-2?）。以上数据与文献[10]相比较，鉴定为threo-3-（4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl）-3-ethoxypropane-1,2-diol.
化合物 6 白色结晶（甲醇）； ESI-MS m/z 243 [M + H]+; 1H NMR （CD3OD, 500 MHz） δ： 7.34 （2H, s, H-2, 6）， 5.20 （1H, dd, J= 5.0, 4.0 Hz, H-8）， 3.93 （1H, dd, J= 11.5, 3.5 Hz, H-9a）， 3.91 （6H, s, H-3, 5-OMe）， 3.79 （1H, dd, J= 11.5, 5.0 Hz, H-9b）； 13C-NMR （CD3OD, 125 MHz） δ： 199.7 （C-7）， 149.1 （C-3, 5）， 143.0 （C-4）， 126.8 （C-1）， 107.8 （C-2, 6）， 75.6 （C-8）， 66.2 （C-9）， 56.9 （C-3, 5-OMe）。与文献[11]相比较，鉴定为2,3-dihydroxy-1-（4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl）-1-propanone.
化合物 7 白色粉末； ESI-MS m/z 325 [M – H]–； 1H NMR （CD3OD, 500 MHz） δ： 6.93 （1H, d, J = 1.5 Hz, H-2?）， 6.81 （1H, dd, J = 2.0, 8.5 Hz, H-6?）， 6.75 （1H, d, J = 8.0 Hz, H-5?）， 3.99 （1H, dd, J = 8.5, 12.5 Hz, H-4）， 3.86 （3H, s, H-3?-OMe）， 3.70 （1H, dd, J = 5.5, 11.0 Hz, H-7a）， 3.57 （1H, t, J = 9.0 Hz, H-9）， 3.52 （1H, t, J = 11.0 Hz, H-7b）， 3.10 （1H, dd, J = 12.5, 17.5 Hz, H-3a）， 2.76 （1H, dd, J = 8.5, 17.5 Hz, H-3b）； 13C NMR （CD3OD, 125 MHz） δ：177.1 （C-2）， 148.7 （C-3?）， 147.3 （C-4?）， 126.9 （C-1?）， 123.2 （C-6?）， 115.9 （C-5?）， 114.1 （C-2?）， 110.3 （C-5）， 76.3 （C-9）， 71.6 （C-10）， 70.6 （C-8）， 65.5 （C-7）， 56.5 （C-3?-OMe）， 46.0 （C-4）， 34.4 （C-3）。以上数据与文献[12]相比较，故鉴定为foveospirolide.
化合物 8 淡黄色粉末； ESI-MS m/z 529 [M – H]–； 1H-NMR （CD3OD, 500 MHz） δ： 7.61 （1H, d, J = 16.0 Hz, H-7?）， 7.52 （1H, d, J = 16.0 Hz, H-7?）， 7.04 （1H, d, J = 1.5 Hz）， 7.02 （1H, d, J = 1.5 Hz H-2?, 2?）， 6.93 （2H, m, H-6?, 6?）， 6.76 （2H, d, J = 8.0 Hz, H-6?, 6?）， 6.31 （1H, d, J = 16.0 Hz）， 6.18 （1H, d, J = 16.0 Hz, H-8?, 8?）， 5.55 （1H, m, H-3）， 5.11 （1H, dd, J = 3.0, 8.0 Hz, H-4）， 4.36 （1H, m, H-5）， 3.73 （3H, s, H-7-OMe）， 2.08~2.12, 2.23~2.36 （4H, m, H-2, 6） ; 13C-NMR （CD3OD, 125 MHz） δ：175.2 （C-7）， 168.5, 167.9 （C-9?, 9?）， 149.8, 149.7 （C-4?, 4?）， 147.7 （C-7?, 7?）， 146.8 （C-3?, 3?）， 127.7, 127.5 （C-1?, 1?）， 123.1 （C-6?, 6?）， 116.5 （C-5?, 5?）， 115.2, 115.1 （C-2', 2?）， 114.7, 114.8 （C-8?, 8?）， 75.8 （C-1）， 74.9（C-4）， 69.1 （C-3）， 68.6 （C-4）， 53.1 （C-7-OMe）， 38.5 （C-6）， 38.4 （C-2）。以上数据与文献[13]相比较，故鉴定为3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸甲酯。
化合物 9 淡黄色粉末； ESI-MS m/z 545 [M + H]+; 1H-NMR （CD3OD, 500 MHz） δ： 7.61 （1H, d, J = 16.0 Hz, H-7?）， 7.52 （1H, d, J = 16.0 Hz, H-7?）， 7.04 （1H, d, J = 1.5 Hz）， 7.02 （1H, d, J = 1.5 Hz, H-2?, 2?）， 6.92 （2H, m, H-6?, 6?）， 6.76 （2H, d, J = 8.0 Hz, H-6? 6?）， 6.31 （1H, d, J = 16.0 Hz）， 6.19 （1H, d, J = 16.0 Hz, H- H-8?, 8?）， 5.57 （1H, m, H-3）， 5.13 （1H, dd, J = 3.0, 8.0 Hz, H-4）， 4.37 （1H, m, H-5）， 4.13~4.21 （2H, m, H-7-OCH2-）， 2.08~2.12, 2.24~2.35 （4H, m, H-2, 6）， 1.26 （3H, t, J = 7.0 Hz, H-CH3） ; 13C-NMR （CD3OD, 125 MHz） δ：174.7 （C-7）， 168.5, 167.9 （C-9?, 9?）， 149.7, 149.6 （C-4?, 4?）， 147.7, 147.6 （C-7?, 7?）， 146.8, 146.7 （C-3?, 3?）， 127.7, 127.5 （C-1?, 1?）， 123.1 （C-6?, 6?）， 116.5 （C-5?, 5?）， 115.2, 115.1 （C-2?, 2?）， 114.7, 114.8 （C-8?, 8?）， 75.7 （C-1）， 75.0 （C-4）， 69.1 （C-3）， 68.7 （C-4）， 62.7 （C-7-OCH2-）， 38.6 （C-6）， 38.3 （C-2）， 14.3 （C-CH3）。以上数据与文献[13]相比较，故鉴定为3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸乙酯。
化合物 10 淡黄色粉末； ESI-MS m/z 529 [M – H]–； 1H-NMR （CD3OD, 500 MHz） δ： 7.58 （1H, d, J = 5.5 Hz, H-7?）， 7.55 （1H, d, J = 5.5 Hz, H-7?）， 7.04 （2H, m, H-2?, 2?）， 6.92 （1H, dd, J = 8.0, 1.5 Hz, H-6?）， 6.89 （1H, dd, J = 8.0, 2.0 Hz, H-6?）， 6.77 （1H, d, J = 8.0 Hz, H-5?）， 6.75 （1H, d, J = 8.5 Hz, H-5?）， 6.29 （1H, d, J = 2.0 Hz, H-8?）， 6.26 （1H, d, J = 1.5 Hz, H-8?）， 5.63 （1H, m, H-5）， 5.05 （1H, dd, J = 8.0, 3.0 Hz, H-4）， 4.33 （1H, m, H-3）， 3.77 （3H, s, H-7-OMe）， 2.21~2.36 （4H, m, H-2, 6） ; 13C-NMR （125 MHz, CD3OD） δ：176.1 （C-7）， 168.5, 168.4 （C-9?, 9?）， 149.6 （C-4?, 4?）， 147.4 （C-7?, 7?）， 146.8 （C-3?, 3?）， 127.8, 127.7 （C-1?, 1?）， 123.2, 123.1 （C-6?, 6?）， 116.5 （C-5?, 5?）， 115.1 （C-2?, 2?）， 115.0, 114.9 （C-8?, 8?），75.2 （C-1, 4）， 69.8 （C-3）， 66.0 （C-5）， 52.9 （C-7-OMe）， 41.3 （C-2）， 36.8 （C-6）。以上数据与文献[14]相比较，故鉴定为4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸甲酯。
化合物 11 淡黄色粉末； ESI-MS m/z 545 [M + H]+; 1H NMR （CD3OD, 500 MHz） δ： 7.58 （1H, d, J = 5.5 Hz, H-7?）， 7.55 （1H, d, J = 5.5 Hz, H-7?）， 7.04 （2H, m, H-2?, 2?）， 6.93 （1H, dd, J = 8.0, 1.5 Hz, H-6?）， 6.90 （1H, dd, J = 8.5, 2.0 Hz, H-6?）， 6.77 （1H, d, J = 8.0 Hz, H-5?）， 6.75 （1H, d, J = 8.0 Hz, H-5?）， 6.29 （1H, d, J = 1.5 Hz, H-8?）， 6.26 （1H, d, J = 1.0 Hz, H-8?）， 5.64 （1H, m, H-5）， 5.04 （1H, dd, J = 8.0, 3.0 Hz, H-4）， 4.33 （1H, m, H-3）， 4.28 （2H, m, H-7-OCH2-）， 2.12~2.20, 2.35–~2.38 （4H, m, H-2,6）， 1.32 （3H, t, J = 7.0 Hz, H-CH3） ; 13C NMR （125 MHz, CD3OD） δ：175.1 （C-7）， 168.5, 168.4 （C-9?, 9?）， 149.6 （C-4?, 4?）， 147.4 （C-7?, 7?）， 146.8 （C-3?, 3'‘）， 127.8, 127.7 （C-1?, 1?）， 123.2, 123.1 （C-6?, 6?）， 116.5 （C-5?, 5?, 115.2, 115.1 （C-2?, 2?）， 115.0, 114.9 （C-8?, 8?）， 75.2 （C-1, 4）， 69.8 （C-3）， 66.1 （C-5）， 62.6 （C-7-OCH2-）， 41.4 （C-2）， 36.8 （C-6）， 14.4 （C-CH3）。以上数据与文献[13]相比较，故鉴定为4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸乙酯。
化合物 12 淡黄色粉末； ESI-MS m/z 529 [M – H]–； 1H NMR （CD3OD, 500 MHz） δ： 7.63 （1H, d, J = 16.0 Hz, H-7?）， 7.56 （1H, d, J = 16.0 Hz, H-7?）， 7.07 （2H, m, H-2?, 2?）， 6.98 （2H, m, H-6?, 6?）， 6.80 （2H, dd, J = 4.5, 8.5 Hz, H-5?, 5?）， 6.35 （1H, d, J = 16.0 Hz, H-8?）， 6.23 （1H, d, J = 16.0 Hz, H-8?）， 5.41 （1H, m, H-5）， 5.32 （1H, m, H-3）， 3.99 （1H, m, H-4）， 3.70 （3H, s, H-7-OMe）， 2.14~2.21, 2.30~2.36 （4H, m, H-2, 6） ; 13C-NMR （CD3OD, 125 MHz） δ：175.6 （C-7），168.7, 167.9 （C-9?, 9?）， 149.8, 149.6 （C-4?, 4?）， 147.4, 147.1 （C-7?, 7?）， 146.9, 146.8 （C-3?, 3?）， 127.9, 127.6 （C-1?, 1?）， 123.1, 123.0 （C-6?, 6?）， 116.5 （C-5?, 5?）， 115.4 （C-8?）， 115.1 （C-2?, 2?）， 114.8 （C-8?）， 74.6 （C-1）， 72.2 （C-5）， 72.0 （C-3）， 69.4 （C-4）， 53.0 （C-7-OMe）， 36.7 （C-6）， 35.6 （C-2）。以上数据与文献[13]相比较，故鉴定为3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸甲酯。
化合物 13 淡黄色粉末； ESI-MS m/z 545 [M + H]+; 1H NMR （CD3OD, 500 MHz） δ： 7.64 （1H, d, J = 16.0 Hz, H-7?）， 7.56 （1H, d, J = 16.0 Hz, H-7?）， 7.06 （1H, d, J = 2.0 Hz）， 7.08 （1H, d, J = 2.0 Hz, H-2?, 2?）， 6.97 （2H, m, H-6?,6?）， 6.78 （2H, dd, J = 4.5, 8.5 Hz, H-5?, 5?）， 6.35 （1H, d, J = 16.0 Hz, H-8?）， 6.23 （1H, d, J = 16.0 Hz, H-8?）， 5.42 （1H, m, H-5）， 5.32 （1H, m, H-3）， 3.99 （1H, m, H-4）， 4.14 （2H, m, H-7-OCH2-）， 2.31~2.37, 2.14~2.21 （4H, m, H-2, 6）， 1.25 （3H, t, J = 7.0 Hz, H-OMe）； 13C NMR （125 MHz, CD3OD） δ： 175.1 （C-7）， 168.7, 167.9 （C-9?, 9?）， 149.7, 149.5 （C-4?, 4?）， 147.4, 147.1 （C-7?, 7?）， 146.9, 146.8 （C-3?, 3?）， 127.9, 127.6 （C-1?, 1?）， 123.0 （C-6?, 6?）， 116.5 （C-5?, 5?）， 115.4 （C-8?）， 115.1 （C-2?, 2?）， 114.8 （C-8?）， 74.5 （C-1）， 72.3 （C-5）， 72.0 （C-3）， 69.8 （C-4）， 62.6 （C-7-OCH2-）， 36.6 （C-6）， 35.6 （C-2），14.3 （C-CH3）。以上数据与文献[14]相比较，故鉴定为3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸乙酯。
化合物 14 白色粉末； ESI-MS m/z 343 [M – H]–； 1H-NMR （CD3OD, 500 MHz） δ： 7.36 （2H, s, H-2, 6）， 5.37 （1H, d, J = 1.0 Hz, H-1?）， 4.26~4.29 （1H, m, H-5?）， 4.17 （1H, m, H-2?）， 3.94 （1H, dd, J = 11.0, 3.5 Hz, H-3?）， 3.88 （6H, s, H-3, 5-OMe）， 3.47 （1H, t, J= 9.5 Hz, H-4?）， 1.22 （3H, d, J= 6.5 Hz, H-6?）； 13C-NMR （CD3OD, 125 MHz） δ： 173.7 （C-7）， 154.4 （C-3, 5）， 139.8 （C-4）， 127.7 （C-1）， 107.9 （C-2, 6）， 103.3 （C-1?）， 73.6 （C-4?）， 72.2 （C-2?）， 71.9 （C-3?）， 71.2 （C-5?）， 56.6 （C-3, 5-OMe）， 17.8 （C-6?）。以上数据与文献[15]相比较，故鉴定为syringicacid-4-O-α-L-rhamnopyranoside.
化合物 15 黄色粉末； ESI-MS m/z 161 [M + Na]+; 1H-NMR （CD3OD, 500 MHz） δ： 9.68 （1H, s, H-7）， 7.31 （2H, m, H-2, 6）， 6.91 （1H, d, J = 8.0, Hz, H-5）； 13C-NMR （CD3OD, 125 MHz） δ： 193.0 （C-7）， 153.7 （C-4）， 148.6 （C-3）， 130.8 （C-1）， 126.4 （C-6）， 116.3 （C-5）， 115.3 （C-2）。以上数据与文献[16]相比较，故鉴定为原儿茶醛。
化合物 16 黄色粉末； ESI-MS m/z 169 [M + H]+; 1H-NMR （CD3OD, 500 MHz） δ：7.56 （2H, m, H-2, 6）， 6.84 （1H, d, J = 9.0 Hz, H-5）， 3.90 （3H, s, H-3-OMe）； 13C-NMR （CD3OD, 125 MHz） δ： 170.1 （C-7）， 152.6 （C-4）， 148.6 （C-3）， 125.2 （C-6）， 123.3 （C-1）， 115.8 （C-2）， 113.9 （C-5）， 56.4 （C-3-OMe）。以上数据与文献[17]相比较，故鉴定为香草酸。
化合物 17 黄色粉末； ESI-MS m/z 207 [M + Na]+; 1H NMR （CD3OD, 500 MHz） δ： 7.19~7.20 （2H, m, H-2, 6）， 3.88 （3H, s, H-3-OMe）； 13C-NMR （CD3OD, 125 MHz） δ： 170.5 （C-7）， 149.0 （C-3）， 146.1 （C-5）， 140.1 （C-4）， 122.8 （C-1）， 112.1 （C-6）， 106.3 （C-2）， 56.6 （C-3-OMe）。以上数据与文献[18]相比较，故鉴定为3-甲氧基-4, 5-二羟基苯甲酸。
化合物 18 黄色粉末； ESI-MS m/z 183 [M + H]+; 1H-NMR （CD3OD, 500 MHz） δ： 7.17 （1H, s, H-2）， 7.16 （1H, s,H-6）， 3.89 （3H, s, H-3-OMe）， 2.52 （3H, s, H-8）； 13C NMR （CD3OD, 125 MHz） δ： 199.6 （C-7）， 149.3 （C-3）， 146.3 （C-5）， 141.3 （C-4）， 129.3 （C-1）， 111.5 （C-6）， 105.0 （C-2）， 56.7 （C-3-OMe）， 26.2 （C-8）。以上数据与文献[19]相比较，故鉴定为4,5-dihydroxy-3-methoxyacet-ophenone.
4 体外抗炎活性
本研究利用RAW 264.7细胞生成NO模型对所分离得到的成分进行体外活性筛选。RAW264.7细胞用高糖DMEM培养基（加10%胎牛血清，100 mg·L-1的青霉素和100 mg·L-1链霉素）于37 ℃在5% CO2的培养箱中培养，每天换培养液1次。实验分为对照、LPS刺激 （1 mg·L-1）、姜黄素、吲哚美辛、给药组。对照组采用上述高糖DMEM补充体积，其他组用LPS （1 mg·L-1）诱导炎症，阳性药组采用姜黄素与吲哚美辛处理细胞，药物组采用多个浓度协同LPS （1 mg·L-1）处理细胞，以8 × 105 cells/mL接种于96孔板，每组3个复孔，刺激24 h后，吸取培养液上清（50 μL），采用Griess法测定NO浓度，酶标仪540 nm波长检测吸光度[20].
结果显示，相对于阳性药地塞米松，其IC50为12.2 μmol·L-1,化合物8, 9, 11, 13, 15具有一定的抑制NO生成作用，IC50分别为85.8, 66.6, 72.5, 53.9, 51.1 μmol·L-1.
5 结果与讨论
本研究对岗梅茎的水提物进行了化学成分研究，从共中鉴定了18个酚类，包括2个木脂素类，5个苯丙素类，6个绿原酸类，5个苯甲酸类似物，其中11个化合物（3~7,9,11,13,14,17,18）为首次从冬青属中分离得到，5个（2,8,10,15,16）为首次从岗梅中分离得到，丰富了对岗梅茎的化学成分认识。考虑到大孔树脂分段中使用了乙醇，化合物4,5,9,11,13应该为分离过程中的人工产物。
基于岗梅茎水提物显着的体内抗炎作用（结果另发表），本研究采用RAW264.7细胞模型对岗梅茎的水提物、分离流分和单体化合物都进行了抗炎作用评价，结果显示，相对于阳性对照地塞米松（IC50为12.2 μmol·L-1），仅化合物8,9,11,13,15对RAW264.7细胞中的NO生成显示有一定的抑制作用，IC50为51.1~85.8 μmol·L-1,其它化合物未观察到抑制效果。
岗梅中主要含有三萜和酚类两大类成分，且以前者的含量更高。课题组同期进行的三萜类成分研究，同样没有观察到体外抗炎活性[4],提示岗梅的体内抗炎效果，不排除来源于多种成分的协同作用结果，也不排除真正的活性物质为这些成分的代谢产物所贡献，具体的原因有待后续研究。
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