好好学习,天天向上,一流范文网欢迎您!
当前位置:首页 >> 最新范文 内容页

岗梅茎水提物中酚类成分的结构鉴定

岗梅茎水提物中酚类成分的结构鉴定 本文关键词:岗梅,鉴定,成分,结构,茎水提物中酚类

岗梅茎水提物中酚类成分的结构鉴定 本文简介:摘要:综合运用多种色谱技术从岗梅茎的水提物中分离得到了18个酚类成分,经波谱学方法鉴定其结构,包括2个木脂素类(1,2),5个苯丙素类(3~7),6个绿原酸类(8~13),5个苯甲酸类似物(14~18),其中3~7,9,11,13,14,17,18为首次从冬青属中分离得到,2,8,10,15,16为

岗梅茎水提物中酚类成分的结构鉴定 本文内容:

  摘要:综合运用多种色谱技术从岗梅茎的水提物中分离得到了18个酚类成分,经波谱学方法鉴定其结构,包括2个木脂素类(1, 2),5个苯丙素类(3~7),6个绿原酸类(8~13),5个苯甲酸类似物(14~18),其中3~7, 9, 11, 13, 14, 17, 18为首次从冬青属中分离得到,2, 8, 10, 15, 16为首次从岗梅中分离得到。抗炎活性筛选结果显示,8, 9, 11, 13, 15对RAW264.7细胞中的NO生成显示有一定的抑制作用,其IC50为51.1~85.8 μmol﹒L-1.本研究为进一步阐明岗梅茎的抗炎药效物质及药材的质量评价研究提供了参考。

  

  关键词:岗梅; 冬青属; 冬青科; 酚类成分; 抗炎活性;

  

  岗梅为冬青属植物梅叶冬青Ilex asprella (Hook. et. Arn.) Champ. ex Benth.的干燥根及茎,其性凉、味苦,归肺、脾、胃经,具有清热解毒、生津止渴、利咽消肿、散瘀止痛之功效,临床上用于治疗风热感冒、急慢性咽喉炎、肺热咳嗽、咽喉肿痛、跌打瘀痈等病症。除了入药外,岗梅也作为凉茶饮品的原料使用,因此市场需求量大,致使野生资源日渐紧缺。当前一方面正大力人工种植,另一方面也基于部分省区的传统用法,将岗梅茎与根一同入药使用。然而有关岗梅茎的研究很少[1].

  

  课题组观察了岗梅根和茎的镇痛抗炎作用,发现茎的水提液与根一样具有显着的抗炎效果,作用机制与经由NF-κB, JAK2/STAT3和MAPK通路下调组织细胞中的TNF-α, IL-6, IL-1β炎症因子水平相关[2].同时也对岗梅茎的化学成分展开了探索,分离鉴定了三萜皂苷、木脂素、酚酸等化合物[3-5].本课题作为其中一部分,继续对岗梅茎中的成分进行研究,从茎的水提物中分离得到了18个成分,利用多种波普学方法鉴定了其结构,包括2个木脂素类 (7S,8R)-dihydro-3-hydroxy-8-hydroxy-methyl-7-(4-hydroxy-3-methoxyph-enyl)-1-benzofuranpropanol (1)和(7SR)-4,9,9'-trihydroxy-3,3?,5-trimethoxy-4?,7-epoxy-8,5?-neo-lignan4-O-β-D-glucopyranoside (2);5个苯丙素类xylocoside A (3)、7-O-ethylguaiacylglycerol (4)、threo-3-(4-hydroxy-3,5-dimetho-xyphenyl)-3-ethoxypropane-1,2-diol (5)、2,3-dihydroxy-1-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-1-propanone (6)、foveospirolide (7);6个绿原酸类3,4-二咖啡酰基奎宁酸甲酯(8)、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸乙酯(9)、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸甲酯(10)、4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸乙酯(11)、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸甲酯(12)、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸乙酯(13);5个苯甲酸类似物syringicacid-4-O-α-L-rhamnopyranoside (14)、原儿茶醛(15)、香草酸 (16)、3-甲氧基-4,5-二羟基苯甲酸(17)、4,5-dihydroxy-3-methoxyacet-ophenone(18),其中3~7, 9, 11, 13, 14, 17, 18为首次从冬青属中分离得到,2, 8, 10, 15, 16为首次从岗梅中分离得到。同时筛选了体外抗炎活性,结果显示,化合物8, 9, 11, 13, 15对RAW264.7细胞中的NO生成显示有一定的抑制作用,IC50值为51.1~85.8 μmol﹒L-1.

  

  1 材料

  

  1.1 药材

  

  药材于2016年9月采收于广东省梅州市平原县仁居镇华润三九青草湖种植基地,经北京中医药大学中药学院张媛副教授鉴定为梅叶冬青I. asprella的茎,药材标本 (2016GM0802) 存放于北京中医药大学中药现代研究中心。

  

  1.2 细胞

  

  小鼠巨噬细胞RAW 264.7细胞系购自上海细胞所。

  

  1.3 仪器和试剂

  

  Varian Inova-500型核磁共振仪;LCMS-IT-TOF系统(Shimadzu, 日本);制备型高效液相色谱仪(Waters);半制备色谱柱Reprosil-Pur Basic C18 (10 mm× 250 mm, 5 μm) Sephadex LH-20 (Pharmacia);旋转蒸发仪(Buchi, 瑞士);ODS (40~63 μm, Merck,德国);HP-20大孔树脂(DIAION, 日本);柱色谱硅胶(200~300目)及薄层色谱硅胶板GF254(青岛海洋化工厂);提取和分离中所用化学试剂均为分析纯(北京化工厂);SANYO MCO-18AIC细胞培养箱(三洋, 日本);OptiMair超净工作台(ESCO, 新加坡);瑞士TECAN M1000型多功能酶标仪;DMEM培养基(Hyclone, 美国);胎牛血清(Gibco, 美国);NO试剂盒(北京普利莱基因技术有限公司);阳性对照为地塞米松(Sigma, 美国)。

  

  2 提取与分离

  

  称取98 kg岗梅茎干品,用流动水冲洗岗梅茎,洗净泥沙;600 L水浸泡30 min,加热煮沸2 h,过滤煎煮液;600 L水加热煮沸2 h,300目滤布过滤煎煮液;合并煎煮液,滤过,70~80 ℃条件下滤液浓缩干燥至干浸膏4.0 kg.得率4.11%.

  

  95%乙醇洗脱部位(1.6 kg) 经硅胶柱色谱分离,经二氯甲烷-甲醇(10:1~0:1) 梯度洗脱,相似洗脱部分合并后,共得到12份洗脱段(I~XII)。流分II采用硅胶柱色谱依次以乙酸乙酯-甲醇-0.5%甲酸(30:1:0.05~0:1:0.05),洗脱,得到6个小流分(II1~II6)。II2经制备HPLC (甲醇-水-甲酸, 30:70:0.1, 3.0 mL﹒min-1)得到15 (tR = 19.26 min, 11.7 mg)和16 (tR = 20.64 min, 13.7 mg)。II3经Sephadex LH-20 (甲醇)、正相硅胶色谱柱和ODS柱色谱分离得到5个流分 (II3A~II3E)。II3A 结晶得到化合物6 (19.7 mg)。II3B经正相硅胶色谱柱,依次用二氯甲烷-甲醇-0.5%甲酸(50:1:0.05~0:1:0.05)洗脱得到7个子流分(III3B1~II3B7)。II3B5经HPLC制备(乙腈-水-甲酸, 20:80:0.1, 3.0 mL﹒min-1)得到化合物4 (tR = 8.12 min, 2.5 mg)和5 (tR = 8.33 min, 5.8 mg)。

  

  流分III采用硅胶柱色谱依次以乙酸乙酯-甲醇-0.5%甲酸(30:1:0.05~0:1:0.05),洗脱,得到13个小流分(III1–III13)。因III2与III3有交叉,故将二者合并统一为III2,并经Sephadex LH-20 (甲醇)洗脱得到8个流分(III2A~III2H)。III2D经正相硅胶色谱柱,依次用石油醚-乙酸乙酯-0.5%甲酸(3:1:0.05~0:1:0.05)洗脱得到8个子流分,其中III2D7经HPLC (甲醇-水-甲酸, 40:60:0.1, 6.0 mL﹒min-1)得到化合物1 (tR = 28.7 min, 3.0 mg),III2D8经HPLC (甲醇-水-甲酸, 25:75:0.1, 3.0 mL﹒min-1)得到化合物7 (tR = 23.51 min, 4.3 mg)和14 (tR = 68.68 min, 5.7 mg)。III2E经HPLC (甲醇-水-甲酸, 25:75:0.1, 3.0 mL﹒min-1)得到化合物17 (tR = 20.2 min, 5.2 mg)和18 (tR = 23.5 min, 2.4 mg)。III2G经HPLC制备(乙腈-水-甲酸, 25:75:0.1, 3.0 mL﹒min-1)得到化合物10 (tR = 12.74 min, 5.4 mg), 12 (tR = 17.15 min, 4.2 mg), 8 (tR = 18.95 min, 5.7 mg), 11 (tR = 19.94 min, 3.9 mg), 13 (tR = 25.22 min, 10.0 mg)和9 (tR = 30.96 min, 19.6 mg)。

  

  流分IV采用硅胶柱色谱依次以乙酸乙酯-甲醇-1%纯水-0.5%甲酸(10:1:1:0.05~0:1:1:0.05, v/v),洗脱,得到12个小流分(IV1~IV12)。IV6经Sephadex LH-20 (甲醇)和正相硅胶洗脱,得到4个小流分(IV6A~IV6D)。IV6C经HPLC制备(甲醇-水-甲酸, 35:65:0.1, 6.0 mL﹒min-1)得到化合物3 (tR = 14.15 min, 5.3 mg)和2 (tR = 71.35 min, 23 mg)。

  

  3 结构鉴定

  

  化合物 1 白色粉末; ESI-MS m/z 345 [M – H]–; 1H-NMR (CD3OD, 500 MHz) δ: 6.99 (1H, d, J = 1.5 Hz, H-2), 6.86 (1H, dd, J = 1.5, 8.5 Hz, H-6), 6.78 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-5), 6.62 (1H, brs, H-2?), 6.58 (1H, br s, H-6?), 5.50 (1H, d, J = 6.5 Hz, H-7), 3.88 (1H, m, H-9a), 3.83 (3H, s, H-3-OMe), 3.76 (1H, dd, J = 7.5, 11.0 Hz, H-9b), 3.57 (2H, t, J = 6.5 Hz, H-9?), 3.46 (1H, m, H-8), 2.57 (2H, t, J = 7.5 Hz, H-7?), 1.80 (2H, m, H-8?); 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δ: 149.1 (C-3), 147.4 (C-4), 146.5 (C-4?), 141.9 (C-3?), 136.7 (C-1?), 135.1 (C-5?), 129.8 (C-1), 119.7 (C-6), 117.0 (C-6?), 116.7 (C-2?), 116.1 (C-5), 110.6 (C-2), 88.7 (C-7), 65.2 (C-9), 62.3 (C-9?), 56.4 (C-3-OMe), 55.8 (C-8), 35.8 (C-8?), 32.7 (C-7?)。以上数据与文献[6]相比较,故鉴定为(7S,8R)-dihydro-3-hydroxy-8-hydroxy-methyl-7-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1-benzofuranpropanol.

  

  化合物2 白色粉末; ESI-MS m/z 575 [M + Na]+; 1H-NMR (CD3OD, 500 MHz) δ: 6.75 (3H, s, H-2, 2', 6), 6.72 (1H, s, H-6‘), 5.57 (1H, d, J = 6.0 Hz, H-7), 3.88 (3H, s, H-3'-OMe), 3.86~3.90 (1H, m, H-9a), 3.82 (6H, s, H-3, 5-OMe), 3.76~3.80 (2H, m, H-9b, H-glc-6a), 3.65~3.69 (1H, m, H-glc-6b), 3.57 (2H, t, J = 6.5 Hz, H-9?), 3.41~3.49 (4H, m, H-8, H-glc-2~4), 3.21 (1H, m, H-glc-5), 2.63 (2H, t, J = 7.5 Hz, H-7?), 1.82 (2H, m, H-8?); 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δ: 154.4 (C-3, 5), 147.4 (C-4?), 145.2 (C-3?), 140.3 (C-1), 137.2 (C-1?), 135.6 (C-4), 129.4 (C-5?), 117.9 (C-6?), 114.2 (C-2?), 104.4 (C-2, 6), 105.2 (C-glc-1), 88.5 (C-7), 78.3 (C-glc-5), 77.8 (C-glc-3), 75.7 (C-glc-2), 71.4 (C-glc-4), 65.1 (C-9), 62.5 (C-glc-6), 62.2 (C-9?), 57.0 (C-3, 5-OMe), 56.8 (C-3?-OMe), 55.7 (C-8), 35.8 (C-8?), 32.9 (C-7?)。以上数据与文献[7]相比较,鉴定为(7S,8R)-4,9,9?-trihydroxy-3,3?,5-trimethoxy-4?,7-epoxy-8,5?-neolignan4-O-β-D-glucopyranoside.

  

  化合物 3 白色粉末; ESI-MS m/z 413 [M + Na]+; 1H-NMR (CD3OD, 500 MHz) δ: 6.54 (2H, s, H-2, 6), 4.27 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-glc-1), 3.96~3.98 (1H, m, H-8), 3.92 (1H, dd, J = 3.5 10.5 Hz, H-9a), 3.85 (1H, m, H-glc-6a), 3.83 (6H, s, H-3, 5-OMe), 3.65 (1H, dd, J = 5.0, 12.0 Hz, H-glc-6b), 3.41 (1H, dd, J = 7.0, 10.5 Hz, H-9b), 3.37 (1H, t, H-glc-3), 3.24~3.28 (3H, m, H-glc-2, 4, 5), 2.76 (1H, dd, J = 6.5, 13.5 Hz, H-7a), 2.69 (1H, dd, J = 6.5, 13.5 Hz, H-7b); 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δ: 149.1 (C-3, 5), 135.1 (C-4), 130.5 (C-1), 107.7 (C-2, 6), 104.9 (C-glc-1), 77.9 (C-glc-3, 5), 75.2 (C-glc-2), 74.5 (C-9), 73.1 (C-8), 71.6 (C-glc-4), 62.6 (C-glc-6), 56.7 (C-3, 5-OMe), 40.8 (C-7)。以上数据与文献[8]相比较,故鉴定为xylocoside A.

  

  化合物 4 白色粉末; ESI-MS m/z 243 [M + H]+; 1H-NMR (CD3OD, 500 MHz) δ: 6.95 (1H, s, H-2), 6.77 (2H, m, H-5, 6), 4.19 (1H, d, J = 6.5 Hz, H-7), 3.87 (3H, s, H-3-OMe), 3.72 (1H, m, H-8), 3.67~3.69 (1H, dd, J = 4.0, 11.0 Hz, H-9a), 3.56~3.60 (1H, dd, J = 6.5, 11.0 Hz H-9b), 3.34~3.42 (2H, m, H-1?), 1.16 (3H, t, J = 7.0 Hz, H-2?); 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δ:148.9 (C-3), 147.2 (C-4), 132.1 (C-1), 121.9 (C-6), 115.8 (C-5), 112.3 (C-2), 83.8 (C-7), 76.3 (C-8), 65.3 (C-1?), 64.4 (C-9), 56.4 (C-3-OMe), 15.6 (C-2’)。以上数据与文献[9]相比较,鉴定化合物为7-O-ethylguaiacylglycerol.

  

  化合物 5 白色粉末; ESI-MS m/z 273 [M + H]+; 1H-NMR (CD3OD, 500 MHz) δ: 6.65 (2H, s, H-2, 6), 4.19 (1H, d, J = 6.5 Hz, H-7), 3.86 (6H, s, H-3, 5-OMe), 3.72 (1H, m, H-8), 3.67~3.71 (1H, m, H-9a), 3.57~3.61 (1H, dd, J = 6.5, 11.0 Hz, H-9b), 3.34~3.43 (2H, m, H-1?), 1.17 (3H, t, J = 7.0 Hz, H-2?); 13C NMR (CD3OD, 125 MHz) δ: 149.1 (C-3, 5), 136.2 (C-4), 131.3 (C-1), 106.1 (C-2, 6), 84.1 (C-7), 76.2 (C-8), 65.3 (C-1?), 64.4 (C-9), 56.7 (C-3, 5-OMe), 15.6 (C-2?)。以上数据与文献[10]相比较,鉴定为threo-3-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-3-ethoxypropane-1,2-diol.

  

  化合物 6 白色结晶(甲醇); ESI-MS m/z 243 [M + H]+; 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ: 7.34 (2H, s, H-2, 6), 5.20 (1H, dd, J= 5.0, 4.0 Hz, H-8), 3.93 (1H, dd, J= 11.5, 3.5 Hz, H-9a), 3.91 (6H, s, H-3, 5-OMe), 3.79 (1H, dd, J= 11.5, 5.0 Hz, H-9b); 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δ: 199.7 (C-7), 149.1 (C-3, 5), 143.0 (C-4), 126.8 (C-1), 107.8 (C-2, 6), 75.6 (C-8), 66.2 (C-9), 56.9 (C-3, 5-OMe)。与文献[11]相比较,鉴定为2,3-dihydroxy-1-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl)-1-propanone.

  

  化合物 7 白色粉末; ESI-MS m/z 325 [M – H]–; 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ: 6.93 (1H, d, J = 1.5 Hz, H-2?), 6.81 (1H, dd, J = 2.0, 8.5 Hz, H-6?), 6.75 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5?), 3.99 (1H, dd, J = 8.5, 12.5 Hz, H-4), 3.86 (3H, s, H-3?-OMe), 3.70 (1H, dd, J = 5.5, 11.0 Hz, H-7a), 3.57 (1H, t, J = 9.0 Hz, H-9), 3.52 (1H, t, J = 11.0 Hz, H-7b), 3.10 (1H, dd, J = 12.5, 17.5 Hz, H-3a), 2.76 (1H, dd, J = 8.5, 17.5 Hz, H-3b); 13C NMR (CD3OD, 125 MHz) δ:177.1 (C-2), 148.7 (C-3?), 147.3 (C-4?), 126.9 (C-1?), 123.2 (C-6?), 115.9 (C-5?), 114.1 (C-2?), 110.3 (C-5), 76.3 (C-9), 71.6 (C-10), 70.6 (C-8), 65.5 (C-7), 56.5 (C-3?-OMe), 46.0 (C-4), 34.4 (C-3)。以上数据与文献[12]相比较,故鉴定为foveospirolide.

  

  化合物 8 淡黄色粉末; ESI-MS m/z 529 [M – H]–; 1H-NMR (CD3OD, 500 MHz) δ: 7.61 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-7?), 7.52 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-7?), 7.04 (1H, d, J = 1.5 Hz), 7.02 (1H, d, J = 1.5 Hz H-2?, 2?), 6.93 (2H, m, H-6?, 6?), 6.76 (2H, d, J = 8.0 Hz, H-6?, 6?), 6.31 (1H, d, J = 16.0 Hz), 6.18 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-8?, 8?), 5.55 (1H, m, H-3), 5.11 (1H, dd, J = 3.0, 8.0 Hz, H-4), 4.36 (1H, m, H-5), 3.73 (3H, s, H-7-OMe), 2.08~2.12, 2.23~2.36 (4H, m, H-2, 6) ; 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δ:175.2 (C-7), 168.5, 167.9 (C-9?, 9?), 149.8, 149.7 (C-4?, 4?), 147.7 (C-7?, 7?), 146.8 (C-3?, 3?), 127.7, 127.5 (C-1?, 1?), 123.1 (C-6?, 6?), 116.5 (C-5?, 5?), 115.2, 115.1 (C-2', 2?), 114.7, 114.8 (C-8?, 8?), 75.8 (C-1), 74.9(C-4), 69.1 (C-3), 68.6 (C-4), 53.1 (C-7-OMe), 38.5 (C-6), 38.4 (C-2)。以上数据与文献[13]相比较,故鉴定为3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸甲酯。

  

  化合物 9 淡黄色粉末; ESI-MS m/z 545 [M + H]+; 1H-NMR (CD3OD, 500 MHz) δ: 7.61 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-7?), 7.52 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-7?), 7.04 (1H, d, J = 1.5 Hz), 7.02 (1H, d, J = 1.5 Hz, H-2?, 2?), 6.92 (2H, m, H-6?, 6?), 6.76 (2H, d, J = 8.0 Hz, H-6? 6?), 6.31 (1H, d, J = 16.0 Hz), 6.19 (1H, d, J = 16.0 Hz, H- H-8?, 8?), 5.57 (1H, m, H-3), 5.13 (1H, dd, J = 3.0, 8.0 Hz, H-4), 4.37 (1H, m, H-5), 4.13~4.21 (2H, m, H-7-OCH2-), 2.08~2.12, 2.24~2.35 (4H, m, H-2, 6), 1.26 (3H, t, J = 7.0 Hz, H-CH3) ; 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δ:174.7 (C-7), 168.5, 167.9 (C-9?, 9?), 149.7, 149.6 (C-4?, 4?), 147.7, 147.6 (C-7?, 7?), 146.8, 146.7 (C-3?, 3?), 127.7, 127.5 (C-1?, 1?), 123.1 (C-6?, 6?), 116.5 (C-5?, 5?), 115.2, 115.1 (C-2?, 2?), 114.7, 114.8 (C-8?, 8?), 75.7 (C-1), 75.0 (C-4), 69.1 (C-3), 68.7 (C-4), 62.7 (C-7-OCH2-), 38.6 (C-6), 38.3 (C-2), 14.3 (C-CH3)。以上数据与文献[13]相比较,故鉴定为3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸乙酯。

  

  化合物 10 淡黄色粉末; ESI-MS m/z 529 [M – H]–; 1H-NMR (CD3OD, 500 MHz) δ: 7.58 (1H, d, J = 5.5 Hz, H-7?), 7.55 (1H, d, J = 5.5 Hz, H-7?), 7.04 (2H, m, H-2?, 2?), 6.92 (1H, dd, J = 8.0, 1.5 Hz, H-6?), 6.89 (1H, dd, J = 8.0, 2.0 Hz, H-6?), 6.77 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5?), 6.75 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-5?), 6.29 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-8?), 6.26 (1H, d, J = 1.5 Hz, H-8?), 5.63 (1H, m, H-5), 5.05 (1H, dd, J = 8.0, 3.0 Hz, H-4), 4.33 (1H, m, H-3), 3.77 (3H, s, H-7-OMe), 2.21~2.36 (4H, m, H-2, 6) ; 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ:176.1 (C-7), 168.5, 168.4 (C-9?, 9?), 149.6 (C-4?, 4?), 147.4 (C-7?, 7?), 146.8 (C-3?, 3?), 127.8, 127.7 (C-1?, 1?), 123.2, 123.1 (C-6?, 6?), 116.5 (C-5?, 5?), 115.1 (C-2?, 2?), 115.0, 114.9 (C-8?, 8?),75.2 (C-1, 4), 69.8 (C-3), 66.0 (C-5), 52.9 (C-7-OMe), 41.3 (C-2), 36.8 (C-6)。以上数据与文献[14]相比较,故鉴定为4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸甲酯。

  

  化合物 11 淡黄色粉末; ESI-MS m/z 545 [M + H]+; 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ: 7.58 (1H, d, J = 5.5 Hz, H-7?), 7.55 (1H, d, J = 5.5 Hz, H-7?), 7.04 (2H, m, H-2?, 2?), 6.93 (1H, dd, J = 8.0, 1.5 Hz, H-6?), 6.90 (1H, dd, J = 8.5, 2.0 Hz, H-6?), 6.77 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5?), 6.75 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5?), 6.29 (1H, d, J = 1.5 Hz, H-8?), 6.26 (1H, d, J = 1.0 Hz, H-8?), 5.64 (1H, m, H-5), 5.04 (1H, dd, J = 8.0, 3.0 Hz, H-4), 4.33 (1H, m, H-3), 4.28 (2H, m, H-7-OCH2-), 2.12~2.20, 2.35–~2.38 (4H, m, H-2,6), 1.32 (3H, t, J = 7.0 Hz, H-CH3) ; 13C NMR (125 MHz, CD3OD) δ:175.1 (C-7), 168.5, 168.4 (C-9?, 9?), 149.6 (C-4?, 4?), 147.4 (C-7?, 7?), 146.8 (C-3?, 3'‘), 127.8, 127.7 (C-1?, 1?), 123.2, 123.1 (C-6?, 6?), 116.5 (C-5?, 5?, 115.2, 115.1 (C-2?, 2?), 115.0, 114.9 (C-8?, 8?), 75.2 (C-1, 4), 69.8 (C-3), 66.1 (C-5), 62.6 (C-7-OCH2-), 41.4 (C-2), 36.8 (C-6), 14.4 (C-CH3)。以上数据与文献[13]相比较,故鉴定为4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸乙酯。

  

  化合物 12 淡黄色粉末; ESI-MS m/z 529 [M – H]–; 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ: 7.63 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-7?), 7.56 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-7?), 7.07 (2H, m, H-2?, 2?), 6.98 (2H, m, H-6?, 6?), 6.80 (2H, dd, J = 4.5, 8.5 Hz, H-5?, 5?), 6.35 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-8?), 6.23 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-8?), 5.41 (1H, m, H-5), 5.32 (1H, m, H-3), 3.99 (1H, m, H-4), 3.70 (3H, s, H-7-OMe), 2.14~2.21, 2.30~2.36 (4H, m, H-2, 6) ; 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δ:175.6 (C-7),168.7, 167.9 (C-9?, 9?), 149.8, 149.6 (C-4?, 4?), 147.4, 147.1 (C-7?, 7?), 146.9, 146.8 (C-3?, 3?), 127.9, 127.6 (C-1?, 1?), 123.1, 123.0 (C-6?, 6?), 116.5 (C-5?, 5?), 115.4 (C-8?), 115.1 (C-2?, 2?), 114.8 (C-8?), 74.6 (C-1), 72.2 (C-5), 72.0 (C-3), 69.4 (C-4), 53.0 (C-7-OMe), 36.7 (C-6), 35.6 (C-2)。以上数据与文献[13]相比较,故鉴定为3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸甲酯。

  

  化合物 13 淡黄色粉末; ESI-MS m/z 545 [M + H]+; 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ: 7.64 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-7?), 7.56 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-7?), 7.06 (1H, d, J = 2.0 Hz), 7.08 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-2?, 2?), 6.97 (2H, m, H-6?,6?), 6.78 (2H, dd, J = 4.5, 8.5 Hz, H-5?, 5?), 6.35 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-8?), 6.23 (1H, d, J = 16.0 Hz, H-8?), 5.42 (1H, m, H-5), 5.32 (1H, m, H-3), 3.99 (1H, m, H-4), 4.14 (2H, m, H-7-OCH2-), 2.31~2.37, 2.14~2.21 (4H, m, H-2, 6), 1.25 (3H, t, J = 7.0 Hz, H-OMe); 13C NMR (125 MHz, CD3OD) δ: 175.1 (C-7), 168.7, 167.9 (C-9?, 9?), 149.7, 149.5 (C-4?, 4?), 147.4, 147.1 (C-7?, 7?), 146.9, 146.8 (C-3?, 3?), 127.9, 127.6 (C-1?, 1?), 123.0 (C-6?, 6?), 116.5 (C-5?, 5?), 115.4 (C-8?), 115.1 (C-2?, 2?), 114.8 (C-8?), 74.5 (C-1), 72.3 (C-5), 72.0 (C-3), 69.8 (C-4), 62.6 (C-7-OCH2-), 36.6 (C-6), 35.6 (C-2),14.3 (C-CH3)。以上数据与文献[14]相比较,故鉴定为3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸乙酯。

  

  化合物 14 白色粉末; ESI-MS m/z 343 [M – H]–; 1H-NMR (CD3OD, 500 MHz) δ: 7.36 (2H, s, H-2, 6), 5.37 (1H, d, J = 1.0 Hz, H-1?), 4.26~4.29 (1H, m, H-5?), 4.17 (1H, m, H-2?), 3.94 (1H, dd, J = 11.0, 3.5 Hz, H-3?), 3.88 (6H, s, H-3, 5-OMe), 3.47 (1H, t, J= 9.5 Hz, H-4?), 1.22 (3H, d, J= 6.5 Hz, H-6?); 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δ: 173.7 (C-7), 154.4 (C-3, 5), 139.8 (C-4), 127.7 (C-1), 107.9 (C-2, 6), 103.3 (C-1?), 73.6 (C-4?), 72.2 (C-2?), 71.9 (C-3?), 71.2 (C-5?), 56.6 (C-3, 5-OMe), 17.8 (C-6?)。以上数据与文献[15]相比较,故鉴定为syringicacid-4-O-α-L-rhamnopyranoside.

  

  化合物 15 黄色粉末; ESI-MS m/z 161 [M + Na]+; 1H-NMR (CD3OD, 500 MHz) δ: 9.68 (1H, s, H-7), 7.31 (2H, m, H-2, 6), 6.91 (1H, d, J = 8.0, Hz, H-5); 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δ: 193.0 (C-7), 153.7 (C-4), 148.6 (C-3), 130.8 (C-1), 126.4 (C-6), 116.3 (C-5), 115.3 (C-2)。以上数据与文献[16]相比较,故鉴定为原儿茶醛。

  

  化合物 16 黄色粉末; ESI-MS m/z 169 [M + H]+; 1H-NMR (CD3OD, 500 MHz) δ:7.56 (2H, m, H-2, 6), 6.84 (1H, d, J = 9.0 Hz, H-5), 3.90 (3H, s, H-3-OMe); 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δ: 170.1 (C-7), 152.6 (C-4), 148.6 (C-3), 125.2 (C-6), 123.3 (C-1), 115.8 (C-2), 113.9 (C-5), 56.4 (C-3-OMe)。以上数据与文献[17]相比较,故鉴定为香草酸。

  

  化合物 17 黄色粉末; ESI-MS m/z 207 [M + Na]+; 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ: 7.19~7.20 (2H, m, H-2, 6), 3.88 (3H, s, H-3-OMe); 13C-NMR (CD3OD, 125 MHz) δ: 170.5 (C-7), 149.0 (C-3), 146.1 (C-5), 140.1 (C-4), 122.8 (C-1), 112.1 (C-6), 106.3 (C-2), 56.6 (C-3-OMe)。以上数据与文献[18]相比较,故鉴定为3-甲氧基-4, 5-二羟基苯甲酸。

  

  化合物 18 黄色粉末; ESI-MS m/z 183 [M + H]+; 1H-NMR (CD3OD, 500 MHz) δ: 7.17 (1H, s, H-2), 7.16 (1H, s,H-6), 3.89 (3H, s, H-3-OMe), 2.52 (3H, s, H-8); 13C NMR (CD3OD, 125 MHz) δ: 199.6 (C-7), 149.3 (C-3), 146.3 (C-5), 141.3 (C-4), 129.3 (C-1), 111.5 (C-6), 105.0 (C-2), 56.7 (C-3-OMe), 26.2 (C-8)。以上数据与文献[19]相比较,故鉴定为4,5-dihydroxy-3-methoxyacet-ophenone.

  

  4 体外抗炎活性

  

  本研究利用RAW 264.7细胞生成NO模型对所分离得到的成分进行体外活性筛选。RAW264.7细胞用高糖DMEM培养基(加10%胎牛血清,100 mg·L-1的青霉素和100 mg·L-1链霉素)于37 ℃在5% CO2的培养箱中培养,每天换培养液1次。实验分为对照、LPS刺激 (1 mg·L-1)、姜黄素、吲哚美辛、给药组。对照组采用上述高糖DMEM补充体积,其他组用LPS (1 mg·L-1)诱导炎症,阳性药组采用姜黄素与吲哚美辛处理细胞,药物组采用多个浓度协同LPS (1 mg·L-1)处理细胞,以8 × 105 cells/mL接种于96孔板,每组3个复孔,刺激24 h后,吸取培养液上清(50 μL),采用Griess法测定NO浓度,酶标仪540 nm波长检测吸光度[20].

  

  结果显示,相对于阳性药地塞米松,其IC50为12.2 μmol·L-1,化合物8, 9, 11, 13, 15具有一定的抑制NO生成作用,IC50分别为85.8, 66.6, 72.5, 53.9, 51.1 μmol·L-1.

  

  5 结果与讨论

  

  本研究对岗梅茎的水提物进行了化学成分研究,从共中鉴定了18个酚类,包括2个木脂素类,5个苯丙素类,6个绿原酸类,5个苯甲酸类似物,其中11个化合物(3~7,9,11,13,14,17,18)为首次从冬青属中分离得到,5个(2,8,10,15,16)为首次从岗梅中分离得到,丰富了对岗梅茎的化学成分认识。考虑到大孔树脂分段中使用了乙醇,化合物4,5,9,11,13应该为分离过程中的人工产物。

  

  基于岗梅茎水提物显着的体内抗炎作用(结果另发表),本研究采用RAW264.7细胞模型对岗梅茎的水提物、分离流分和单体化合物都进行了抗炎作用评价,结果显示,相对于阳性对照地塞米松(IC50为12.2 μmol·L-1),仅化合物8,9,11,13,15对RAW264.7细胞中的NO生成显示有一定的抑制作用,IC50为51.1~85.8 μmol·L-1,其它化合物未观察到抑制效果。

  

  岗梅中主要含有三萜和酚类两大类成分,且以前者的含量更高。课题组同期进行的三萜类成分研究,同样没有观察到体外抗炎活性[4],提示岗梅的体内抗炎效果,不排除来源于多种成分的协同作用结果,也不排除真正的活性物质为这些成分的代谢产物所贡献,具体的原因有待后续研究。

  

  参考文献

  

  [1]杜冰曌, 杨鑫瑶, 冯晓, 等。 岗梅的化学成分和药理作用研究进展[J]. 中国中药杂志, 2017, 42 (1): 20.  

  [2]Yang X, Gao X, Du B, et al. The Ilex asprella aqueous extracts exert in vivo anti-inflammatory potential by regulating NF-κB, JAK2/STAT3, and MAPK signaling pathways [J]. J Ethnopharmacol, 2018, 225: 234.

  [3]杜冰曌, 张和新歌, 杨鑫瑶, 等。 岗梅茎的化学成分研究[J]. 中国中药杂志, 2017, 42 (21): 4154.

  [4]Zhang H, Du B, Zhao F, et al. Three new triterpenoid saponins from the stems of Ilex asprella[J]. J Asian Nat Prod Res, 2018, 20: 439.

  [5]Du B, Zhao F, Zhang H, et al. Asprenols A~H, phenolic constituents from the stems of Ilex asprella[J].Fitoterapia, 2018, 129: 220.  

  [6]Kim T H, Ito H, Hayashi K, et al. Aromatic constituents from the heartwood of Santalum album [J]. Chem Pharm Bull, 2005, 53(6): 641.  

  [7]Shu J, Liang F, Zhu G, et al. Lignan glycosides from the rhizomes of Smilax trinervula and their biological activities [J]. Phytochem Lett, 2017, 20: 1.  

  [8]Xu Z, Chai X, Bai C, et al. Xylocosides A~G, Phenolic glucosides from the stems of Xylosma controversum [J]. Helv Chim Acta, 2008, 91(7): 1346.  

  [9]Yang X, Zhao P, Ma Y, et al. Mixed lignan-neolignans from Tarenna attenuate [J].J Nat Prod, 2007, 70(4): 521.

  [10]Lee T, Kuo Y, Wang G, et al. Five new phenolics from the roots of Ficus beecheyana [J]. J Nat Prod, 2002, 65(10): 1497.  

  [11]苏东敏。 薄叶山柑水溶性化学成分研究[J]. 中国中药杂志, 2008, 33(9): 1021.  

  [12]Somwong P, Suttisri R, Buakeaw A. New sesquiterpenes and phenolic compound from Ficus foveolata [J]. Fitoterapia, 2013, 85(1): 1.  

  [13]关焕玉, 兰燕宇, 廖尚高, 等。 羊耳菊中咖啡酰基奎宁酸类化学成分研究[J]. 天然产物研究与开发, 2014, 26(12): 1948.  

  [14]刘玉峰, 杨秀伟, 武滨, 等。 款冬花化学成分的研究[J]. 中国中药杂志, 2007, 32(22): 2378.  

  [15]郭林新,马养民,李梦云, 等。 三叶木通利尿活性部位筛选及其化学成分[J]. 中国实验方剂学杂志, 2017, 23(3): 66.  

  [16]赵志勇, 杨姣。 中药连翘的酚酸类化学成分研究[J]. 辽宁医学院学报, 2016, 37(3):12.  

  [17]陈艳。 半枝莲的化学成分研究[D]. 沈阳:沈阳药科大学, 2007.  

  [18]董礼, 陈敏, 李梅, 等。 柴胡红景天中一个新氰苷类化合物[J]. 药学学报, 2009, 44(12): 1383.

闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閹间礁纾归柟闂寸绾惧綊鏌熼梻瀵割槮缁炬儳缍婇弻鐔兼⒒鐎靛壊妲紒鐐劤缂嶅﹪寮婚悢鍏尖拻閻庨潧澹婂Σ顔剧磼閻愵剙鍔ょ紓宥咃躬瀵鎮㈤崗灏栨嫽闁诲酣娼ф竟濠偽i鍓х<闁绘劦鍓欓崝銈囩磽瀹ュ拑韬€殿喖顭烽弫鎰緞婵犲嫷鍚呴梻浣瑰缁诲倿骞夊☉銏犵缂備焦岣块崢閬嶆⒑闂堟稓澧曢柟鍐查叄椤㈡棃顢橀姀锛勫幐闁诲繒鍋涙晶钘壝虹€涙﹩娈介柣鎰彧閼板潡鏌熷畷鍥р枅妞ゃ垺顨嗗鍕偓锝嗘尰缁挸顫忕紒妯诲閻熸瑥瀚禒鈺呮⒑閸涘﹥鐓ョ紒澶婄埣楠炴垿濮€閵堝懐顦ㄥ銈嗘煥濡插牓鏁冮崒娑氬幈闂佸搫娲㈤崝宀勬倶閻樼粯鐓曢柟鑸妼娴滄儳鈹戦敍鍕杭闁稿﹥鐗犲畷婵嬫晝閳ь剟鈥﹂崸妤€鐒垫い鎺戝€荤壕鍏笺亜閺冨倸甯舵い锝呯-缁辨帗娼忛妸锕€闉嶉梺鐟板槻閹虫﹢鐛幘璇茬鐎广儱鎷嬪Λ婊冣攽閻樺灚鏆╁┑顔诲嵆瀹曞綊鎮℃惔妯荤亙濠电偞鍨崺鍕极閸曨垱鐓曢柡鍥ュ妼楠炴鈧娲橀悡锟犲蓟濞戙垹鐒洪柛鎰典簴婵洭姊虹紒妯诲碍缂佺粯锕㈠璇测槈閵忊晜鏅濋梺鎸庣箓濞层劑鎮惧ú顏呪拺闂傚牃鏅濈粙缁樹繆閻愭壆鐭欑€殿喛顕ч埥澶愬閳╁啯鐝抽梻浣告啞娓氭宕板☉姘厹闁逞屽墰缁辨捇宕掑▎鎰偘婵$偞娼欓幗婊堝极椤曗偓閺佹捇鎮╅懠顒傛毇闂備礁鍟块幖顐﹀箠韫囨蛋澶愬醇閻旇櫣顔曢梺鐟邦嚟閸嬫稓绮鑸电厽閹煎瓨绻傚畵鍡樻叏婵犲嫮甯涢柟宄版嚇瀹曘劍绻濋崘銊ュ闂傚倷鐒﹀鍧楀礈濞嗘挸围缂佸娉曢弳锕€霉閸忓吋缍戦柛鎰ㄥ亾婵$偑鍊栭幐鐐叏鐎靛摜鐭堥柨鏇炲€归埛鎴犵棯椤撶偞鍣虹憸鎶婂懐纾奸柣妯哄暱閻忊晝绱掗娆惧殭闁宠棄顦垫慨鈧柍閿亾闁瑰嘲顭峰娲礈閹绘帊绨介梺鍝ュУ閹瑰洭宕烘繝鍥у嵆闁绘梻绻濈花濠氭⒑閸濆嫬鈧悂鎮樺┑瀣垫晜妞ゆ挾鍠愰崣蹇撯攽閻樻彃顏悽顖涚洴閺岀喎鐣¢悧鍫濇畻閻庤娲忛崝宥囨崲濠靛纾兼繛鎴炵懅閺嗩厼鈹戦悩鍨毄闁稿孩鍨瑰濠囨寠婢规繃妞介弫鍐焵椤掑嫧鈧棃宕橀埡鍐炬祫闁诲函缍嗛崑鍛枍濠婂牊鈷戠紓浣姑慨鍫熺箾閸忚偐鎳呮繛鍡愬灲閹瑩鎮滃Ο鐓庡箥闂傚倷绶¢崣蹇曠不閹达箑绀夐柨鏇炲€归悡銉╂煛閸モ晛浠滈柍褜鍓欑紞濠囧箖閿熺姴鍗抽柕蹇ョ磿閸樻悂姊洪幖鐐插姌闁稿氦椴告穱濠冪附閸涘﹦鍘介棅顐㈡处濞叉牗鐗庡┑鐑囩到濞层倝鏁冮鍫涒偓渚€寮撮姀鈩冩珳闂婎偄娲﹂崺鍐磻閹捐閿ゆ俊銈勮兌閸樻悂鏌h箛鏇炰粶濠⒀嗘鐓ら柟缁㈠枟閻撳啴鏌曟径妯虹仯闁伙絽鐏氶〃銉╂倷瀹割喖鍓伴梺瀹狀潐閸ㄥ灝鐣烽崼鏇炵厸闁逞屽墯缁旂喖寮撮悩鐢碉紳闂佺ǹ鏈懝楣冨焵椤掑嫷妫戠紒顔肩墛缁楃喖鍩€椤掑嫨鈧線寮介鐐茬獩濡炪倖鐗楃粙鎴炴償婵犲洦鈷戦柛锔诲幖椤e吋绻濋姀鈽呰€块柟顔光偓鎰佹建闁逞屽墴瀵鎮㈤崨濠勭Ф婵°倧绲介崯顖烆敁瀹ュ鈷戠紒瀣皡閸旂喖鏌涜箛鏃撹€跨€殿喖顭锋俊鍫曞炊瑜庨悗鎶芥⒑閸涘⿴娈橀柛瀣洴閿濈偤顢曢敂瑙f嫼闂佸憡绋戦敃銉╂偂閵夆晜鐓欓悹鍥囧懐锛熼梺鐟扮畭閸ㄥ綊鍩ユ径濠庢僵闁挎繂鎳嶆竟鏇炩攽閻愭潙鐏﹂柣鐕傜磿缁辨挸顫濋懜鐢靛幗濡炪倖鎸荤划宀勫焵椤掍焦绀嬫繝鈧担绯曟斀闁绘ǹ顕滃銉х磼閵娿劌浜归柤楦夸含缁辨帒螣闂€鎰泿闂備礁鎼ù鍌涚閻愮數鐭欓柤濮愬€楃壕鑲╃磽娴h疮缂氱紒鐘虫尰閵囧嫰顢曢敐鍥╃杽濡炪們鍨洪敃銏ゅ箖閵忋倕绀堥棅顐幗閸╂盯姊婚崒姘偓鎼佸磹閻戣姤鍤勯柛鎾茬閸ㄦ繃銇勯弽銊с€掑ù鐘冲哺濮婅櫣鎷犻懠顒傤唶缂備胶绮崹鍧楀箖閻戣棄鐓涘ù锝囧劋濞堥箖姊虹憴鍕棆濠⒀勵殜瀹曟劙鎮滈懞銉у幗闂佺懓顕崐鎴濐潩鐠鸿櫣顔嗗┑鐐叉▕娴滄繈鎮¢悢鐓庣缂侇喚鎳撴晶鏌ユ偣閹般劉鍋撻弬銉︽杸濡炪倖姊婚崑鎾诲汲椤掆偓閳规垿鍩勯崘鈺佸攭閻庤娲橀敃銏ゅ春閿熺姴鐒垫い鎺戝€瑰畷鏌ユ煕閳╁啰鈯曢柣鎾跺枛閺岀喖鏌囬敃鈧獮妤冪磽瀹ュ棗鐏︾紒缁樼洴楠炴牠顢橀悙瀵镐憾婵$偑鍊戦崝濠囧磿閻㈢ǹ绠栨繛鍡楁禋閸熷懏銇勯弮鍌氬付濠㈢懓顦版穱濠囨倷椤忓嫧鍋撹娣囧﹪宕堕妸锔界彿濠德板€曢幊搴g不濮樿埖鐓涢柛鎰╁妿婢ф盯鏌¢崨顔惧弨闁哄本鐩俊鐑藉煛婵犲喚妫栭梺鐟板悑濞兼瑩鏁冮鍕垫綎濠电姵鑹剧壕鍏肩箾閸℃ê绗掗柛姗堢磿缁辨挻绗熼崶褎鐝梺鎼炲姀濞夋盯鎮惧畡鎵虫斀閻庯綆鍋呭▍鍥⒑缁嬫寧婀版慨妯稿姂钘濇い鎾跺亹閺€浠嬫煟閹邦剙绾фい銉у仱閺岀喓绮欓幐搴㈠枑缂備緡鍠栭悧濠傤嚗閸曨垰绠涙い鎾跺Т鐢箖姊绘担绋款棌闁稿鎳愰幑銏ゅ礃椤斻垹顦甸獮妯兼惥娴g儤鍤€妤楊亙鍗冲畷鐔碱敇閻橀潧甯掗梻鍌欑窔濞佳兠洪妶鍥e亾濮橆偄宓嗛柣娑卞枛铻i柛蹇曞帶绾绢垶姊洪悜鈺傛珕閻㈩垰娲畷瑙勭鐎n亣鎽曞┑鐐村灦椤倿鎮㈤崫銉ф嚌濡炪倖鐗楃喊宥夘敊瀹ュ鈷掑〒姘e亾闁逞屽墰閸嬫盯鎳熼娑欐珷妞ゆ牗绋忔禍婊堟煛閸愶絽浜鹃梺缁橆殘婵挳鎮鹃悜钘夌骇閹煎瓨鎸婚~宥夋⒑闂堟稓绠氶柡鍛矒瀵煡顢旈崼鐔蜂画濠电姴锕ょ€氼參藟閸懇鍋撶憴鍕婵$偠濮ゆ穱濠囨倻閼恒儲娅囬梺閫炲苯澧版繛鍡愬灲閹瑥霉鐎n偅鏉搁梻浣虹帛閸旀牕岣垮▎鎾崇闁靛牆顦伴悡鐔镐繆閵堝嫮顦﹂柛婵堝劋閹便劍绻濋崘鈹夸虎閻庤娲忛崝宥囨崲濠靛洦濯撮柧蹇撴贡閻f娊姊婚崒娆戝妽闁诡喖鐖煎畷婵堜沪閻e本娈惧銈嗗笒鐎氀囧焵椤掑﹦鐣电€规洜枪铻栭柍褜鍓涚划濠氭晲婢跺鍙嗛梺鍝勫暙濞夛箓骞掑Δ鈧粻顖涚箾瀹割喕绨奸柣鎾跺枛閺岋絽螣閸濆嫮楠囨繝銏f硾鐎氼噣骞夐幖浣哥骇闁割煈鍠楀▓濠氭倵鐟欏嫭绀€闁诲繑鑹惧玻鑳疀濞戞ḿ鍘搁梺鍛婂姦娴滈妲愰幎鑺ョ厽閹艰揪绱曢悾顓㈡煕鎼淬劋鎲炬鐐诧龚缁犳稑霉閺夋妯€闁诡喗鐟╅幃浠嬫偨绾板搴婇梻鍌欒兌鏋柡鍫墮椤繈濡搁妷褎鎳冩繝寰锋澘鈧牠銆冭箛鏃傤洸婵炲棙鎸哥涵鈧梺鍛婂姌鐏忔瑩寮抽敃鍌涚厽闁规儳鍟块惁銊︾箾鐏忔牗娅婇柡灞诲妼閳规垿宕卞Ο鐑橆仧濠电姰鍨奸~澶娒洪悢濂夋綎婵炲樊浜滄导鐘绘煕閺囥劌甯ㄩ柣妯肩帛閻撴洟鏌¢崒婵囩《闁诲繗椴哥换娑㈠幢閹邦剛浼堥梺璇″枟閻熲晠骞冨⿰鍏剧喖鎮℃惔锛勵吋闂傚倸鍊搁崐椋庢閿熺姴鐭楅煫鍥ㄦ礈娑撳秹鏌熸潏鎯ь洭鐎规挷绶氶弻鐔煎箥椤旂⒈鏆梺缁樻尰閻熲晛顫忓ú顏勫瀭妞ゆ洖鎳庨崜閬嶆⒑闂堟稒澶勭紒璇插暣楠炲牓濡搁敂鍓х槇闂佸憡鍔忛弬鍌涚閵忋倖鍊甸悷娆忓绾炬悂鏌涢弬璺ㄐら柟骞垮灩閳规垹鈧綆浜為ˇ鏉款渻閵堝棙灏靛┑顕€娼ч埢鎾寸附閸涘ň鎷绘繛杈剧悼閻℃棃宕靛▎鎾村€垫繛鎴炲笚濞呭懏銇勯锝囩疄濠碘剝鎮傞崺鈩冩媴娓氼垱袧濠电姷顣藉Σ鍛村垂闂堟稈鏋嶉柨婵嗩槸濮规煡鏌ㄩ弴鐐测偓褰掓偂濞戙垺鐓曢柕澶嗘櫓濡垹鐥幆褎鍋ラ柡宀嬬秮婵″爼宕掑顐㈩棜濠电姷鏁告慨鐑藉极閹间礁纾婚柣鎰惈閸ㄥ倿鏌涢锝嗙闁稿绱曢幉鎼佸棘鐠恒劍娈鹃梺闈涚箞閸婃牠鎮為懖鈹惧亾楠炲灝鍔氭俊顐㈢焸楠炲繘鎼归崷顓狅紳闂佺ǹ鏈悷褔宕濆澶嬪珔闂侇剙绉甸悡鐔兼煙閹冭埞闁告棑绠撻弻鈥崇暆閳ь剟宕伴幘璇茬闁绘ü璀﹀Σ鍓х磼閻愵剙鍔ら柣蹇旂箞濠€浣糕攽閻樿宸ラ悗姘煎弮瀹曟劙骞囬悧鍫㈠幐婵炶揪绲挎灙闁逞屽墮濞尖€愁嚕婵犳艾惟闁冲搫锕ラ弲顒€鈹戦鏂や緵闁稿瀚拌棢婵﹩鍘剧弧鈧梺姹囧灲濞佳勭濠婂牊鐓熸俊銈傚亾婵☆偅绻堥獮鍐ㄎ熺悰鈩冩杸闂佺硶鈧磭绠查柣搴℃惈閳规垿顢欐慨鎰捕闂佺ǹ顑嗛幑鍥蓟閿涘嫪娌柛鎾椾讲鍋撻幒妤佺厓鐟滄粓宕滈妸褏绀婇柛鈩冡缚椤╁弶绻濇繝鍌滃⒈闁轰礁鍊归妵鍕箻鐠虹儤鐎繛瀛樼矋缁捇寮婚弴锛勭杸濠电姴鍊婚崝鎾⒑閻熼偊鍤熷┑顕€顥撳Σ鎰版晝閸屾稓鍘介梺鎸庣箓閹虫劙鎮橀柆宥嗙厽妞ゆ挾鍠撻幊鍥煙椤旇偐绉烘鐐扮窔楠炴帡骞嬪┑鎰偓鎶芥⒒娓氣偓閳ь剛鍋涢懟顖涙櫠娴煎瓨鐓曢悗锝冨妼閳ь剚娲熼敐鐐剁疀閹句焦妞介、鏃堝礋椤撗冩暪闂備胶鎳撻崥瀣偩椤忓牆鏄ラ柛鏇ㄥ亽濞兼牠鏌涢…鎴濇灀闁衡偓娴犲鐓冮柦妯侯槹椤ユ粌霉濠婂嫮鐭掗柟顔筋殔椤繈鎮℃惔锛勭潉闁诲氦顫夊ú妯煎枈瀹ュ洦宕叉繝闈涱儏缁€鍐┿亜椤撶喎鐏ユ繛鍫濄偢濮婅櫣鎷犻幓鎺濆妷缂備礁顑嗙敮鐔汇亹濠婂牊鈷戠憸鐗堝俯濡垹绱掗鍛仯闁瑰箍鍨归埥澶娾枎閹邦喚肖闂備礁鎲¢幐鍡涘川閸涱喛澹橀柍瑙勫灴閸┿儵宕卞鍓х泿闂佽瀛╅崙褰掑垂閸洖违闁稿瞼鍋涢柨銈嗕繆閵堝嫯顔夐柟椋庣帛缁绘稒娼忛崜褎鍋ч梺纭呮珪閹瑰洭銆佸顑藉牚闁告侗鍨遍敍蹇涙⒑閸濆嫷妲兼繛澶嬫礃閺呫儱鈹戦悩娈挎殰缂佽鲸娲熷顐ゆ嫚閼碱剚娈鹃梺缁樻⒒閳峰牓寮鍡欑闁瑰鍋熼幊鍕煟濠靛洦绀嬫慨濠冩そ閹筹繝濡堕崨鍛灪缁绘稑霉鐎n偅鐝斿銈嗘穿缂嶄線鐛Ο鍏煎珰闁肩⒈鍓涘畷璺衡攽閻樺灚鏆╁┑顔肩摠鐎靛ジ鏁愭径濠勭潉闂佸壊鍋嗛崰搴㈢瑜版帗鈷掗柛灞炬皑婢ф稓绱掔€n偄濮囬柍璁崇矙椤㈡棃宕奸悢鍙夊闂備礁鎲$粙鎴︽晝閵夆晛鐓曢柟鎵閻撶喖鏌i弮鈧ḿ娆撳礉閿曞倹鐓欐い鏇楀亾缂佺姵鐗犻獮鍐ㄢ堪閸喎鐧勬繝銏犲帨閺備線寮查悩璇茶摕鐎广儱顦导鐘绘煕閺団€崇厫闁轰線绠栧娲传閸曨剙娅濋梺鍝勬噽婵挳锝炶箛鎾佹椽顢旈崟顐ょ崺濠电姷鏁告慨鎾疮椤愶附鍎婇柣鎴eГ閻撶喖鐓崶銊︾濞寸姭鏅涢埞鎴︻敊閸濆嫧鍋撻弴銏犵厺鐎广儱鎲橀弮鍫濆窛妞ゆ棁顫夌€氫粙姊绘担鍛靛綊寮甸鍕仭鐟滄棁妫熼梺鎸庢礀閸婂綊鎮″▎鎴犳/闁哄鐏濋懜鐟懊瑰⿰鈧崡鎶藉箰婵犲倵鏀介柛銉e劙缁ㄥ姊洪崫鍕枆闁稿瀚粋鎺楁晝閸屾稓鍘遍柣搴秵娴滃爼宕曢弮鍫熺厸閻忕偛澧藉ú鎾煕閳轰礁顏€规洘顨婇崺锟犲磼濮樺彉娣梻浣哥枃椤曆呯矓瑜版帒绠栭柍鍝勫暟绾惧吋淇婇婊冨付妤犵偞顨婂缁樻媴閻熼偊鍤嬬紓浣筋嚙閸婂潡鐛繝鍥х疀闁绘鐗嗛埀顒€鐖煎娲敆閳ь剛绮旈悽鍛婂亗闁绘梹鎮舵禍婊堟煙閹规劖纭鹃柡瀣灩閳ь剝顫夊ú鏍儗閸岀偛钃熼柨娑樺濞岊亪鏌涢幘妤€瀚崹杈ㄤ繆閻愵亜鈧垿宕归崫鍔芥椽鎮㈤悡搴㈢€梺鍦濠㈡﹢鐛姀锛勭闁糕剝銆為幋锝傚徔闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閻戣姤鍤勯柛鎾茬閸ㄦ繃銇勯弽顐粶缂佺姵婢橀埞鎴︽偐瀹曞浂鏆¢梺绋款儜缁绘繈寮诲澶婁紶闁告洦鍓欏▍锝夋⒑閽樺鏆熼柛鐘冲姉閹广垹鈽夐姀鐘殿吅濠电偛妫楃换鎺撶閼测晝纾藉ù锝呮惈椤庢挾绱掗幓鎺戔挃闁瑰箍鍨归埥澶愬閻樿尪鈧灝鈹戞幊閸婃洟宕导瀛樺仼濡わ絽鍟埛鎴犵磼鐎n偒鍎ラ柛搴㈠姍閺岀喖鎮烽悧鍫熸倷濡炪倖娲╃徊鍓х矉閹烘柡鍋撻敐鍛粵闁哄懏绻堝铏圭磼濡椿姊垮┑鐐存崄椤绮╅悢鐓庡嵆闁绘劏鏅滈弬鈧俊鐐€栧鑽ゅ垝閵娧呯=婵ǹ鍩栭悡鏇㈡倵閿濆骸浜濋悘蹇曟暬閺屽秷顧侀柛鎾村哺閹垽顢楅崟顐ゎ唵闂佽法鍣﹂幏锟�71%闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閹间礁纾归柟闂寸绾惧綊鏌熼梻瀵割槮缁炬儳缍婇弻鐔兼⒒鐎靛壊妲紒鐐劤缂嶅﹪寮婚悢鍏尖拻閻庨潧澹婂Σ顔剧磼閻愵剙鍔ょ紓宥咃躬瀵鎮㈤崗灏栨嫽闁诲酣娼ф竟濠偽i鍓х<闁诡垎鍐f寖闂佺娅曢幑鍥灳閺冨牆绀冩い蹇庣娴滈箖鏌ㄥ┑鍡欏嚬缂併劌銈搁弻鐔兼儌閸濄儳袦闂佸搫鐭夌紞渚€銆佸鈧幃娆撳箹椤撶噥妫ч梻鍌欑窔濞佳兾涘▎鎴炴殰闁圭儤顨愮紞鏍ㄧ節闂堟侗鍎愰柡鍛叀閺屾稑鈽夐崡鐐差潻濡炪們鍎查懝楣冨煘閹寸偛绠犻梺绋匡攻椤ㄥ棝骞堥妸鈺傚€婚柦妯侯槺閿涙盯姊虹紒妯哄闁稿簺鍊濆畷鎴犫偓锝庡枟閻撶喐淇婇婵嗗惞婵犫偓娴犲鐓冪憸婊堝礂濞戞碍顐芥慨姗嗗墻閸ゆ洟鏌熺紒銏犳灈妞ゎ偄鎳橀弻宥夊煛娴e憡娈查梺缁樼箖濞茬喎顫忕紒妯诲闁芥ê锛嶉幘缁樼叆婵﹩鍘规禍婊堟煥閺冨浂鍤欓柡瀣ㄥ€楃槐鎺撴綇閵婏富妫冮悗娈垮枟閹告娊骞冮姀銈嗘優闁革富鍘介~宀勬⒒閸屾瑧鍔嶉柣顏勭秺瀹曞綊鎸婃径鍛窗閻熸粌绉归幃娲敇閵忊檧鎷绘繛杈剧悼閹虫捇顢氬⿰鍕闁圭粯甯炵粻鑽も偓瑙勬礃閸旀洝鐏冮梺鍛婁緱閸橀箖宕濋敃鈧—鍐Χ閸℃鐟愮紓浣插亾濞撴埃鍋撶€规洜鏁婚、妤呭礋椤掑倸骞堥梻浣瑰缁诲倻鎹㈤幒鏃傜煋妞ゆ柨鐨烽弨浠嬫煃閳轰礁鏆為悘蹇ュ閳ь剝顫夊ú蹇涘礉閹存繍鍤曢柛顐f礀缁狅綁鏌e鈧ḿ褔鐛埀顒€鈹戦悩鍨毄濠殿喕鍗冲畷褰掓偂鎼存ɑ鐏冨┑鐐村灟閸ㄦ椽宕戠€n喗鐓曟繛鎴濆船閻忋儱鈹戦鐓庢毐闁宠鍨块幃鈺佺暦閸ヨ埖娈规俊鐐€戦崕閬嶆晝閵夆晛桅闁告洦鍨扮粻娑㈡煃鏉炴媽鍏屽ù鐘靛亾缁绘繈濮€閿濆棛銆愰柣搴㈢煯閸楀啿顕f繝姘亜闁绘挸楠哥粣娑欑節閻㈤潧孝闁哥噥鍋婇崺鈧い鎺嶇婵秹鏌″畝鈧崰鏍€佸▎鎾村€锋い鎺嶇劍閻﹀酣姊绘笟鈧埀顒傚仜閼活垱鏅堕崜褏纾界€广儱鎳忛ˉ銏⑩偓瑙勬礃濠㈡ǹ鐏冮梺鍛婁緱閸犳牗绂嶅Δ鍛拺闂傚牊渚楀褍鈹戦垾铏窛鐎殿啫鍥х劦妞ゆ帒瀚埛鎺楁煕鐏炵偓鐨戝褎绋撶槐鎺斺偓锝庡亜濞搭噣鏌℃担鍝バ㈡い鎾炽偢瀹曢亶寮撮悩鐢垫毎闂傚倷绀佸﹢杈╁垝椤栨粍鏆滄俊銈呮噹缁犵喖鏌涘┑鍕姢缁炬儳銈稿鍫曞醇濞戞ê顬堝┑鐐存儗閸o綁寮诲☉銏犵厴闁诡垎鍌氼棜婵犵绱曢崑鎴﹀磹閺嶎偅鏆滈柟鐑橆殔绾惧綊鏌i姀鈶跺湱澹曟繝姘厵闁告挆鍛闂佸搫鎳忛悡锟犵嵁閺嶎偄鍨濋柛蹇擃槸娴滈箖鏌ょ喊鍗炲閻庡灚绮嶇换婵嬫偨闂堟稐绮堕梺瀹︽澘濡块柛鎺撳笒椤撳ジ宕惰閻忓﹪姊虹憴鍕妞ゆ泦鍥ㄥ珔闁绘柨鍚嬮悡鐔兼煛閸愩劌鈧摜鏁崜浣虹<闁绘ê纾崣鈧梺鍝勭灱閸犳牠寮婚崶顒佹櫇闁逞屽墴閻涱喖顫滈埀顒勫蓟閺囥垹骞㈡俊顖氭惈椤帒鈹戦纭锋敾婵$偠妫勯悾鐑筋敃閿曗偓缁€瀣⒒閸喓鈽夊鐟扮墦濮婂宕掑▎鎴М闁圭厧鐡ㄧ划搴f閻愬瓨濯撮柛鎾村絻濞堛劍绻濋悽闈浶g痪鏉跨Ч瀵煡寮婚妷锔惧幈濠电偞鍨佃ぐ澶岃姳婵傚憡鐓涢柛灞绢殔娴滈箖姊婚崒姘偓椋庣矆娓氣偓楠炲鍩勯崘顏嗘嚌濠德板€曢幊搴ㄥ磼閵娾晜鐓犳繛鏉戭儐濞呭洭鏌i鐐靛闁靛洤瀚板顒傛崉閵婏妇妾ㄩ梻浣姐€€閸嬫捇鏌ら幁鎺戝姌濞存粍绮撻弻锟犲礃閵娿儮鍋撻崼鏇炵劦妞ゆ巻鍋撴い鎴濇閻忓鈹戦鏂や緵闁告ê澧界划缁樸偅閸愨晝鍘卞┑鐘诧工閸燁偊寮抽悢铏圭<濠㈣埖锚閺嬬喐銇勯妸锝呭姦闁诡喗鐟╁鍫曞箣閻樿京绀夐梺璇叉唉椤煤濠婂牆绐楅柡宥庡幑閳ь兛绀侀埥澶娢熼悙鏉戠濞存粍鎮傚浠嬪Ω閿旀儳缍冮梻鍌欑閹碱偊寮甸鈧叅婵☆垯璀﹂崵妤呮煕閺囥劌浜愭俊鎻掔墛閹便劌螖閳ь剙螞濞嗘挸绐楁慨妞诲亾闁哄矉缍侀幃銏ゅ传閵壯呭帓濠电姭鎷冮崟鍨暥闂佷紮绲剧换鍕垝濞嗗繆鏋庨柣鎰靛墰缁嬩胶绱撻崒姘偓鐑芥倿閿曚焦鎳屽┑鐘愁問閸ㄩ亶骞愰幎钘夎摕闁挎繂顦粻锝夋煟韫囨梹銇熷ù婊勭矒閸┿垽骞樺畷鍥ㄦ畷闂佸憡娲﹂崗姗€骞忓ú顏呪拺缁绢厼鎳庢禍褰掓煕鐎n偆娲撮柛鈹惧亾濡炪倖甯婇懗鑸垫櫠閻㈠憡鐓欐い鏂诲妼濞诧箓宕戦幇鐗堢厾濠殿喗鍔曢埀顒佹礈缁﹪鏁冮崒娑辨濡炪倖鍔戦崹鐑樺緞閸曨厾纾奸悗锝庡亜濞搭喚鈧鍠楅悡锟犵嵁閺嶃劍濯撮柛锔诲幖瀵娊姊绘担铏瑰笡婵炲弶鐗犲畷鎰板捶椤撴稑浜炬慨妯煎亾鐎氾拷

TAG标签: