《勘测定界报告》word版 本文关键词：勘测，报告，定界，word
《勘测定界报告》word版 本文简介：方山县峪口镇吉家庄小学建设用地项目勘测定界技术报告二〇一五年八月编号（号）土地勘测定界技术报告书占地单位：方山县峪口镇吉家庄小学项目用地名称：方山县峪口镇吉家庄小学建设用地项目勘测定界单位：太原市彭丰环保科技有限公司2015年8月22日目录1.土地勘测定界技术说明1页2.土地勘测定界表3页3.土地分
《勘测定界报告》word版 本文内容：
方山县峪口镇吉家庄小学建设用地项目
勘
测
定
界
技
术
报
告
二〇一五年八月
编号（
号）
土地勘测定界技术报告书
占
地
单
位：方山县峪口镇吉家庄小学
项目用地名称：方山县峪口镇吉家庄小学建设用地项目
勘测定界单位：太原市彭丰环保科技有限公司
2015年8月22日
目
录
1.
土地勘测定界技术说明
1页
2.
土地勘测定界表
3页
3.
土地分类面积表
5页
4.
界址点坐标成果表
6页
5.
项目用地现状图
7页
6.
项目用地勘测定界图
9页
7.
测绘资质证书
10页
土地勘测定界技术说明
为测定方山县峪口镇吉家庄小学建设用地项目征用土地的面积、土地利用现状和使用土地的界址，受方山县人民政府的委托，由太原市彭丰环保科技有限公司对该项目进行征地面积勘测定界。
一、工程项目勘测定界依据
勘测定界执行技术标准:
（1）执行《全球定位系统（GPS）测量规范》（CH2001-92）
（2）执行《工程测量规范》GB50026-93
（3）执行《1:500、1:1000、1:2000地形图图式》（GB/T7929-1995）
（4）执行国土资源部《土地勘测定界规程》（TD/T1008-2007）
二、施测单位及日期
该项目勘测定界由太原市彭丰环保科技有限公司承担，2015年8月10日—2015年8月12日完成野外作业及内业整理。
三、勘测定界外业调查情况
依据《土地利用现状调查技术规程》、《城镇地籍调查规程》、《确定土地所有权和使用权的若干规定》等规程,在方山县国土资源局工作人员的组织下,用地单位、相关权属单位、勘测单位等共同到现场指界，勘测技术人员进行了实地测绘，确定了权属界线、项目占地界线。经调查，本项目占用峪口镇吉家庄村的土地。
依据1:1万土地利用现状图，经现场核实，该项目用地范围内及其附近的各土地利用类型界线与实地一致。
将以上外业调查核实的情况准确无误地测绘、转绘到工作底图上，并标注三级土地利用类型编号。
四、勘测定界外业测量情况
测量仪器为动态GPS
(RTK9800±2cm+2PPm)两台套，另有笔记本电脑一台。施测采用1980西安坐标系，按统一高斯正形投影
3°分带，中央子午线为111°；高程系统为1985国家高程基准。测量：采用全球定位系统动态GPS
(RTK9800±2cm+2PPm)全野外数据采集测量界址点。界址点共4个。
五、勘测定界面积量算与汇总情况。
将勘测定界外业采集的界址点数据导入计算机中，在AutoCAD软件平台下，结合外业实地绘制的草图，准确绘制用地范围，并进行实际用地面积汇总。本项目实测占地面积350.9平方米（0.526亩）。
六、相关情况说明。
选用1:1万土地利用现状图作为工作底图。内业采用AutoCAD绘制勘测定界图，各种内外业资料均进行自检，符合《规程》要求。
表A.1
勘测定界表
单位名称
方山县人民政府
经
办
人
单位地址
电
话
主管部门
土地用途
土地座落
峪口镇
相关文件
图幅号
J49
G
054052
勘测面积（公顷）
地
类
所
有
权
农用地
建设用地
未利用地
合计
耕地
园地
林地
草地
小计
工矿及居民点
交通运输用地
小计
未利用地
其他土地
国有
集体
0.0351
0.0351
合计
0.0351
0.0351
占用基本农田面积
勘测定界单位签注
方山县峪口镇吉家庄小学建设用地项目在方山县国土资源局工作人员的组织下,用地单位、相关权属单位、勘测单位等共同到现场指界、施测，地类调查根据实地现状调绘。经勘测定界的用地项目界址点、界址线、用地面积，地类界线、权属界线调查清楚，测量准确，满足《土地勘测定界规程》及《城镇地籍调查规程》的要求。
单
位
主
管：周三生
审
核
人：郭英武
项目负责人：邹建强
盖
章：（土地勘测定界专用章）*年*月*日
5
表A.2
土地分类面积表(集体)
峪口镇
单位：公顷
权属单位
农用地
建设用地
未利用土地
合计
备注
耕地
其中
园地
林地
草地
其他农用地
工矿及居民点用地
交通运输用地
水利设施用地
未利用土地
其它土地
旱地
水浇地
吉家庄村
0.0351
0.0351
合计
0.0351
0.0351
本表要求填写用地范围内原不同权属、不同土地利用类型的土地面积。
篇2：生物化学实验报告-蛋白质分子量测定--凝胶层析法等
生物化学实验报告-蛋白质分子量测定--凝胶层析法等 本文关键词：层析，分子量，凝胶，测定，蛋白质
生物化学实验报告-蛋白质分子量测定--凝胶层析法等 本文简介：生物化学实验报告姓名：专业：院系：学号：实验一蛋白质分子量测定------凝胶层析法1、实验原理凝胶层析法是利用凝胶把分子大小不同的物质分开的一种方法，又叫做分子筛层析法，排阻层析法。凝胶本身是一种分子筛，它可以把分子按大小不同进行分离，如同过筛可以把大颗粒与小颗粒分开一样。但这种“过筛”与普通的过
生物化学实验报告-蛋白质分子量测定--凝胶层析法等 本文内容：
生物化学实验报告
姓名：
专业：
院系：
学号：
实验一
蛋白质分子量测定------凝胶层析法
1、
实验原理
凝胶层析法是利用凝胶把分子大小不同的物质分开的一种方法，又叫做分子筛层析法，排阻层析法。凝胶本身是一种分子筛，它可以把分子按大小不同进行分离，如同过筛可以把大颗粒与小颗粒分开一样。但这种“过筛”与普通的过筛不一样。将凝胶颗粒放在适宜溶剂中浸泡，使其充分戏液膨胀，然后装入层析柱中，加入欲分离的混合物后，再以同一溶剂洗脱，在洗脱过程中，大分子不能进入凝胶内部而沿凝胶颗粒间的缝隙最先流出柱外，而小分子可以进入凝胶内部，流速缓慢，以致最后流出柱外，从而使样品中分子大小不同的物质得到分离。
凝胶是由胶体溶液凝结而成的固体物质，无论是天然凝胶还是人工凝胶，它们的内部都具有很微细的多孔网状结构。凝胶层析法常用的天然凝胶是琼脂糖凝胶，人工合成的凝胶是聚丙烯酰胺凝胶和葡聚糖凝胶，后者的商品名为Sephadex型的各种交联葡聚糖凝胶，它具有不同孔隙度的立体网状结构的凝胶，不溶于水。
这种聚合物的立体网状结构，其孔隙大小与被分离物质分子的大小有相应的数量级。在凝胶充分溶胀后，交联度高的，孔隙小，只有相应的小分子可以通过，适于分离小分子物质。相反，交联度低得孔隙大，适于分离大分子物质。利用这种性质可分离不同分子量的物质。
以下进一步来说明凝胶层析的原理。将凝胶装载柱后，柱床总体积称为“总体积”，以Vt表示。实质上Vt是由Vo，Vi与Vg三部分组成，即Vt=Vi+Vg+Vo。Vo称为“孔隙体积”或“外体积”又称“外水体积”，即存在于柱床内凝胶颗粒外面孔隙之间的水相体积，相应于一般层析柱法中内流动相体积；Vi为内体积，即凝胶颗粒内部所含水相的体积，Vg为凝胶本身的体积，因此Vt-Vo等于Vi+Vg。
洗脱体积与Vo及Vi之间的关系可用下式表示：
Ve=Vo+KdVi
式中Ve为洗脱体积，自加入样品时算起，到组分最大浓度（峰）出现时所流出的体积；Kd为样品组分在二相间的分配系数，也可以说Kd是分子量不同的溶质在凝胶内部和外部的分配系数。它只与被分离物质分子的大小和凝胶颗粒孔隙的大小分布有关，而与柱的长短粗细无光，也就是说它对每一物质为常数，与柱的物理条件无关。Kd可通过实验求得，上式可改写成：
Kd=(Ve-Vo)/Vi
上式中Ve为实际测得的洗脱体积；Vo可用不被凝胶滞留的大分子物质的溶液通过实际测量求出；Vi可由g.Wr求得。因此，对一层析柱凝胶床来说，只要通过实际实验得知某一物质的洗脱体积Ve就可算出它的Kd值。
Vo表示外体积；Vi内体积；VeII、VeIII分别代表组分II和III的洗脱体积。Kd可以有下列几种情况：
1、
当Kd=0时，则Ve=Vo。即对于根本不能进入凝胶内部的大分子物质，洗脱体积等于空隙体积。
2、
当Kd=1时，Ve=Vo+Vi。即小分子可完全渗入凝胶内部时，洗脱体积应为空隙体积与内体积之和。
可以看出，对某一凝胶介质，两种全排出的分子即等于零，虽然分子大小有差别，但不能有分离效果。同样两种分子如都能进入内部空隙，即Kd等于1，它们即使分子大小有不同，也没有分离效果。因此不同型号的凝胶介质，有它一定的使用范围。
3、
当01时，表示凝胶对组分有吸附作用，此时Ve>Vo+Vi。例如一些芳香化合物的洗脱体积远超过理论计算的最大值，这些化合物的Kd>1。如苯丙氨酸，络氨酸和色氨酸在Sephadex
G-25中的Kd值分别为1.2,1.4和2.2。
在实际工作中，对小分子物质也得不到Kd=1的数值，特别是交联度大的凝胶差别更大，如用G-10型得Kd值0.75左右，用G-25型得0.8左右。这是由于一部分水相与凝胶结合牢固，称为凝胶本身的一部分，因而不起作用，小分子不能扩散入内所致。此时Vi即不能以g.WR计算，此为也常有直接用小分子物质D2O,NaCl等通过凝胶柱而由实验计算出Vi值的。另一个解决的办法是不使用Vi与Kd，而用Kav代替Kd，其定义如下：
已知
Kd=（Ve-Vo）/Vi,Vt-Vo代替Vi,则：
Kav=（Ve-Vo）/(Vt-Vo)
即
Va=Vo+Kav(Vt-Vo)
在这里实际上将原来以水作为固定相（Vi）改为水与凝胶颗粒Vt-Vo作为固定相，，而洗脱剂（Ve-Vo）作为流动相。Kav与Kd对交联的凝胶差别较小，而对交联度大的凝胶差别大。
Ve与分子量的关系：对同一类型的化合物，洗脱特性与组分的分子量有关，流过凝胶柱时，按分子量大小顺序流出，分子量大的走在前面。Ve与分子量的关系可用下式表示：
Ve=K1-K2logM
K1和K2为常数，M为分子量，Ve也可用Ve-Vo,Ve/Vo相对保留体积，Ve/Vt或Kav代替，与分子量的关系同上式，只是常数不同，通常多以Kav对分子量的对数作图得一曲线，，称为“选择曲线”。曲线的斜率是说明凝胶性质的一个很重要的特征，在允许的工作范围内，曲线逾陡，则分级逾好，而工作范围逾窄。凝胶层析主要决定于溶质分子的大小，每一类型的化合物如球蛋白类，右旋糖酐类等都有自己得特殊的选择曲线，可用以测定未知的分子量，测定时以便用曲线的直线部分为宜。
用凝胶层析法测定蛋白质的分子量，方法简单，技术易掌握，样品用量少，而且有时不需要纯物质，用一粗制品即可。例如在一粗酶制剂中，为了测定某一酶的分子量，只要测定洗脱液中具有该酶最大活性的部分，然后测定其洗脱体积，即可从标准曲线中查出其分子量。凝胶层析法测定分子量也有一定的局限性，在PH6-8的范围内，线性关系比较好，但在极端PH时，一般蛋白质有可能因变性而偏离。糖蛋白在含糖量超过5%时，测得分子量比真实的要大，铁蛋白则与此相反，测得的分子量比真实的要小。有一些酶底物是糖，如淀粉酶，溶菌酶等会与葡聚糖胶形成络合物，这种络合物与酶-底物络合物相似，因此在葡聚糖凝胶上层析时表现异常。用凝胶层析法所测得分子量的结果，要和其他方法测定相对照，由此可以得到可靠的结论。
凝胶层析技术操作方便，设备简单，周期短，重复性能好，而且条件温和，一般不引起生物活性的变化，目前得到广泛的应用，例如可用于脱盐，浓缩高分子物质的溶液，生化物质的分离提纯，去除热源动物以及用于测定高分子物质的分子量。
二、实验步骤
1、
将实现准备好的凝胶缓慢的注入层析柱中，注意连续加入凝胶不要使凝胶柱出现断层，凝胶柱中不能出现气泡；
2、
待层析柱中凝胶注满后，计算每分钟层析柱下滴液体的滴数，调节液滴下滴速度，再计算液滴滴满2ml时所用的时间，记下该时间；
3、
加样。用胶头滴管吸取0.8ml样品（蓝色葡聚糖酶，牛血清酶，胃蛋白酶，细胞色素C）缓慢的滴入层析柱内凝胶的表面，上面用洗脱液灌满，同时打开蛋白质核酸层析仪，设定好收集满2ml液滴所用时间。记下依次加入样品时所收集的洗脱液的体积。
4、
测定收集的洗脱液在280nm时的吸光值
5、
以洗脱体积为横坐标，以吸光值为纵坐标绘制选择曲线。
3、
实验结果
1、
吸光度测定结果
表
1
第一次加样
第二次加样
第三次加样
第四次加样
编号
吸光度
编号
吸光度
编号
吸光度
编号
吸光度
编号
吸光度
编号
吸光度
1
0.043
7
0.195
13
0.051
19
0.07
25
0.039
31
0.068
2
0.053
8
0.446
14
0.114
20
0.049
26
0.049
32
0.049
3
0.059
9
0.134
15
0.121
21
0.041
27
0.099
33
0.037
4
0.064
10
0.063
16
0.067
22
0.039
28
0.189
5
0.06
11
0.064
17
0.067
23
0.04
29
0.201
6
0.065
12
0.055
18
0.151
24
0.037
30
0.128
2、绘制洗脱曲线
以洗脱体积为横坐标，OD值为纵坐标绘制洗脱曲线如下。
图
1
3、绘制标准曲线
表
2
Ve
OD
M
lgM
4
个
峰
值
16
0.446
200
2.30103
30
0.121
67
1.826075
36
0.151
36
1.556303
58
0.201
13.7
1.136721
以蛋白质分子量的对数lgM为横坐标，Ve为纵坐标，绘制标准曲线如下。
图
2
4、
实验结果分析
1、实验过程中加样是很关键的步骤，加样太快容易造成重叠峰。
2、
洗脱曲线四个峰值明显，表明四种蛋白质样品被有效的分开。
3、
A样和B样，C样和D样之间洗脱体积差异不太大，有可能是后一个样加样时间提早了得缘故，致使两峰值之间的间距较小，会有分离不出，两峰重叠的可能。
4、
根据蛋白质摩尔质量的对数和洗脱体积所作的标准曲线不是一条直线，可能是洗脱体积的误差。如果在实验过程中，收集洗脱液时出现气泡，会严重影响洗脱体积的计算，造成洗脱体积的计算不准确，从而造成误差。蛋白质分析仪也有可能造成机械误差。
5、
从标准曲线看出，蛋白质的分子量所对应的洗脱体积偏小，最有可能造成的误差就是在洗脱蛋白质时出现气泡。为解决这一问题，可以多测量几次洗脱体积，取品均值后再作图案，可以减小误差。
实验二
小麦种子储藏蛋白—HMW-GS的分离（SDS-PAGE）
一、实验目的
利用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）研究小麦种子储藏蛋白C高分子量麦谷蛋白亚基（HMW-GS）组成结构。此外，SDS-PAGE也是测定蛋白质亚基分子质量的常用方法。通过本实验，掌握SDS-PAGE的基本原理、技术及应用。
二、实验原理
用十二烷基硫酸钠（SDS）和还原剂（巯基乙醇或二流苏糖醇）热处理蛋白质样品，蛋白质分子中的二硫键被还原，解离的亚基与SDS发生定量结合后使得蛋白质亚基带上大量负电荷，从而掩盖了蛋白质各种亚基间原有的电荷差异。亚基的构象均呈长棒状，各种蛋白质亚基-
SDS复合物表现出相等的电荷密度，在电场中迁移速度仅与分子量有关。因此，SDS-PAGE可以用来分离蛋白质亚基并测定其分子质量。
三、实验器材及试剂
1.仪器
电泳仪、垂直板电泳槽、台式高速离心机、脱色摇床、加样枪、烧杯50ml
2个，移液管
2.试剂和材料
70%乙醇、50%正丙醇（含2%β-巯基乙醇）250ml、样品提取缓冲液、样品提取液、30%丙烯酰胺+甲叉双丙烯酰胺、分离胶缓冲液（Tris-HCl）pH8.8、浓缩胶缓冲液（Tris-HCl）pH6.8、10%AP溶液、染色液、漂洗液
四、操作步骤
1、样品的提取
（1）取一粒种子研磨粉碎，加入70%乙醇1000ul，10分钟后，12000转离心8分钟；弃乙醇晾干。
（2）加50%正丙醇（含2%β-巯基乙醇）250ul混匀后，50℃水浴1.5小时，中途需震荡，12000转离心8分钟。
（3）取上清夜加3倍体积丙酮置于-20℃＞3小时。
（4）12000转离心8分钟，倒掉丙酮晾干，加提取液250ul，待溶解完全后，在沸水浴煮沸2.5分钟，之后12000转再离心1分钟，上清液用于点样。
2、SDS-PAGE分析
（1）组装电泳槽：见电泳槽使用说明书
（2）凝胶的制备：
取两只干净烧杯（500ml）标号，按下表试剂配方惊醒制胶。在组装好的电泳槽中先制分离胶，待分离胶聚合后，倒掉乙醇溶液，再灌浓缩胶，灌好浓缩胶后迅速插入样品梳静置聚合。分离胶用量15ml，浓缩胶用量5ml。
表1
凝胶的制备试剂配方
聚丙烯酰胺凝胶组成
分离胶（10%）
浓缩胶（3%）
30%Acr-Bis（ml）
H2O
pH8.8Tris-HCL(含SDS、TEMED)（ml）
pH6.8
Tris-HCL(含SDS、TEMED)（ml）
10%AP（ul）
2.5
2.95
2.0
0
100
0.62
3.0
0
1.3
75
（3）加样及电泳
待凝胶聚合完全后，拔掉电泳梳子，然后将电泳槽注满电泳缓冲液，取适量上清液加样，在标准泳道点是上高分子标准蛋白质溶液。上槽接负极，下槽接正极，恒流200mA电泳。待溴酚蓝走出分离胶后30分钟停止电泳，取出玻璃板，剥胶染色。
（4）染色
剥下的胶用蒸馏水洗涤后加入染色液，盖上盖子，放入微波炉低温染色4次，每次1分钟，取出震荡，取出。
（5）脱色
将染色液倒回瓶内，加入漂洗液洗，漂洗两次，每次1-2小时，照相保存。
五．实验结果分析
通过聚丙烯酰胺凝胶电泳得到四条大小不同的条带分离出蛋白质亚基并可知道其亚基的分子量，条带不是很平整可能是梳子没有插好，导致点样不好，也可能是本身做胶就不够好，使得条带不够整齐清晰。
实验三
猪血中超氧化物歧化酶（SOD）的分离纯化及活力测定
一、实验目的
通过本次实验熟悉掌握超氧化物歧化酶（SOD）的分离纯化方以及SOD活力的测定。
二、实验原理：
超氧化物歧化酶（SOD）是一种能专一地清除超氧阴离子自由基（O2-）的金属酶,它具有抗衰老，抗辐射、抗炎和抗癌等作用，因而在医药、化妆品、食品工业具有广泛的应用前景。
SOD是一种酸性蛋白，对热、PH和蛋白酶的水解较一般酶稳定。按照它含的金属离子的不同，可分为Cu-Zn-SOD，Mn-SOD，Fe-SOD等三种。Cu-Zn-SOD为二聚体，呈蓝绿色；Mn-SOD呈紫色；Fe-SOD呈黄褐色。
SOD催化下述反应：2H++2O2-→H2O2+O2。机体内O2-的过量和不足均对机体不利，SOD对过量的O2-的及时清除保证了机体内O2-的含量的相对平衡。机体内O2-的形成可分为生理性和病理性两方面。在一些正常生理过程中会形成一些O2-。例如：呼吸链中电子传递结果可产生一些O2-。在某些疾病过程中会产生大量的O2-。过量的O2-如不及时清除，会对细胞损伤。SOD将O2-歧化为H2O2，而过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化酶可催化过氧化氢分解，在机体内形成一套解毒系统，对机体起防护作用。
本实验采用有机溶剂沉淀法以新鲜猪血为原料，从中提取SOD并进行纯化。酶活力测定可以用一下方法：邻苯三酚自氧化法、黄嘌呤氧化酶法、NBT光还原法、化学发光法、肾上腺素自氧化法、亚硝酸法等。
该实验SOD酶活性采用邻苯三酚自氧化法测定，酶活性单位定义为：每毫升反应溶液中，每分钟抑制邻苯三酚自氧化率达50%的酶量定义为一个酶活单位。
样品中蛋白质含量用考马斯亮蓝G-250法测定。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，与蛋白质结合呈蓝色。在一定的范围内，溶液在595nm波长下光密度与蛋白质含量成正比，可用比色法测定，在测定范围1-1000ug。
SOD同工酶鉴定采用不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分离。用“负”显色法，核黄素经光照所产生的活性氧O2-（氧自由基）能使氯化硝基四氮唑蓝（NBT）由黄色的氧化型转化为蓝色的还原型。由于SOD能够抑制O2-的作用，因此，经电泳分离SOD后，凝胶上无SOD处显色为蓝色，而有SOD处则无色透明，由此可鉴定SOD同工酶的酶谱。
三、
操作步骤
1、
SOD的提取
（1）
取新鲜猪血20ml（预先按0.5:1的比例加入ACD抗凝剂），4000r/m，10min，去上层血浆，取下层红血球粘稠液，并量其体积，然后加入2倍体积的0.9%NaCl溶液清洗，4000r/m，10min，弃上清液，得洗净的红血球浓稠液。
（2）
向洗净的红血球中加入等体积的蒸馏水，剧烈搅拌30min，使其充分溶血。再向溶血液中缓慢加入预冷的0.25倍体积的95%的乙醇溶液和0.15倍体积的氯仿，均匀呈暗红色，再继续搅拌15min，4000r/m，10min，去变性蛋白沉淀物，得上层液，留样2ml。然后将清液在65-70°C恒温水浴中进行热处理，15min后取出迅速冷却至室温，4000r/m，5min，除沉淀，得浅黄色粗酶液，留样2ml。
（3）
向粗酶液中加入等体积的丙酮溶液，冰箱中静置4h，4000r/m，10min弃上清液，得沉淀。将沉淀物用等体积的丙酮溶液洗二次，离心收集沉淀，自然干燥既得淡绿色成品，按1mg/ml溶于蒸馏水，备用。
2、
SOD活力测定
（1）邻苯三酚自氧化率的测定
取4.5ml
50mmol/L
PH
8.3的磷酸缓冲液，4.2ml蒸馏水和1ml
10mmol/L
EDTA-Na2溶液，混匀后在25°C水浴保温20min，取出后立即加入25°C预热过的邻苯三酚溶液0.3ml，迅速摇匀，倒入光径1cm的比色杯内，用10mmol/L
HCl作空白，325nm波长下每隔30s测定光密度值一次，整个操作在4min内完成，计算出每分钟A325的增值，此即为邻苯三酚自氧化率。要求自氧化速率控制在0.07/mim左右。
（2）
酶活力测定
操作与（1）基本一致，加入邻苯三酚前，先加入0.1ml的SOD样液，蒸馏水则减少相应的体积，同理测其光密度值，计算加酶后邻苯三酚自氧化率。
（3）酶活性单位的计算
根据酶活单位定义，按下列公式计算酶活性：
单位活性（U/ml）=(((A0-Am)/A0*100%)/50%)*反应液总体积数*（样液稀释倍数/样液体积）
总活性（U）=单位活性测定*酶原液总体积
（4）蛋白质含量测定（考马斯亮蓝G-250法）
标准曲线的制作：取6支试管，编号，按下表加试剂：
表1.各试管加样量及对应蛋白质含量
试剂
管
号
1
2
3
4
5
6
蛋白质标准液（ml）
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
蒸馏水（ml）
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0
考马斯亮蓝G-250(ml)
5
5
5
5
5
5
蛋白质含量（ug）
0
20
40
60
80
100
盖上塞子，摇匀。注意各管振荡程度尽量一致。在595nm波长下比色测定光密度，比色应在1h内完成。以牛血清蛋白含量（ug）为横坐标，光密度值为纵坐标，绘出标准曲线。
样品中蛋白含量的测定
将待测的SOD溶液并稀释到一定浓度，取1支具塞试管，准确加入0.1ml样品提取液，加入0.9ml蒸馏水和5ml考马斯亮蓝G-250试剂，其余操作与标准曲线制作相同。
蛋白质含量计算
根据所测样品提取液的光密度，在标准曲线上查得相应的蛋白质含
量，计算其浓度。
3、
实验结果
1.测得邻苯三酚自氧化率：
表
3
时间(min)
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
4
A
0.018
0.060
0.098
0.134
0.167
0.200
0.232
0.261
图
3
计算得：A0=0.069/min。
酶活力测定中三个不同量样液的光密度值见下表：
表
4
时间(min)
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
4
样1(50μl)
0.208
0.217
0.225
0.232
0.242
0.249
0.258
0.264
样2(100μl)
0.068
0.073
0.079
0.084
0.088
0.093
0.099
0.104
样2(100μl)
0.051
0.053
0.054
0.055
0.057
0.061
0.062
0.064
计算（方法同1）得：
A1=0.016/min；A2=0.0103/min；A3=0.004/min。
酶活性单位的计算：
单位活性（U/ml）=
表
5
样液体积(ml)
酶原液总体积(ml)
Am
单位活性(U/ml)
总活性(U)
样1
0.05
14
0.016
314.8936
4408.511
样2
0.1
12.5
0.0103
172.6064
2157.58
样3
0.1
5
0.004
189.3617
946.8085
（1）
标准曲线的制作
表4.标准曲线制作各试管加样量及光密度值
试剂
管
号
1
2
3
4
5
6
蛋白质标准液（ml）
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
蒸馏水（ml）
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0
考马斯亮蓝G-250(ml)
5
5
5
5
5
5
蛋白质含量（ug）
0
20
40
60
80
100
光密度值（A595）
0
0.174
0.341
0.452
0.620
0.729
图2.蛋白质含量标准曲线
（2）
样品蛋白质含量
样品光密度测定值及蛋白质含量的计算结果如下表：
表
6
样号
A595平均值
蛋白质含量(μg)
蛋白质浓度(μg/μl)
样1
0.287
36.63186
1.8316
样2
0.171
19.17618
0.1918
样3
0.1185
11.27598
0.1128
（3）
数据处理
表
7
提纯步骤
酶液总体积ml
蛋白质mg/ml
酶活性U/ml
总活性U
比活性U/mg
回收率%
纯化倍数
除血蛋白上清
14
1.8316
314.8936
4408.51
171.92
100
1
热变性后上清
12.5
0.1918
172.6064
2157.58
899.93
48.94
5.23
丙酮沉淀后
0.0117(g)
0.1128
189.3617
946.81
1678.74
21.48
9.76
4、
实验结果分析
1、
蛋白质含量标准曲线不是一条直线，可能是由于分光光度计的读数误差，也有可能是认人为误差。解决方法，可以多次测量取平均值，再舍去离标准曲线较远的点，使标准曲线两边的点数目尽量一样多，再绘制标准曲线，这样就可以减少偶然误差。
2、
样品一的蛋白质含量过高，从后面的电泳图也可以看出样品1混有杂质，说明分离SOD同工酶时细胞可能有溶血。里面含有杂质，所以吸光值较大在标准曲线上所对应的蛋白质含量就过高，所以样品1的蛋白质含量不准确。
3、
表3中邻苯三酚的自氧化率没有达到0.07/mim,可能会对后续实验结果造成影响，最大的影响就是使得所测样品中SOD同工酶抑制邻苯三酚的自氧化率会减小，从而计算出来的酶活性相应减小。
4、
本实验纯化过程中，蛋白质含量、酶总活性逐渐降低，比活性逐渐增加。而酶活性本应随着酶纯度的增加而增大，但本实验没有这样的现象。SOD纯化倍数逐渐增加，最后达到约10倍，但是回收率却只有21%，偏低。说明本实验还存在很多问题，在操作时需要注意。
20
篇3：声速测定实验报告
声速测定实验报告 本文关键词：声速，测定，实验，报告
声速测定实验报告 本文简介：实验序号：28实验题目：声速测定试验时间：2011·11·8实验室：成绩：班级：姓名：学号：指导教师【实验目的】1．了解压电换能器的功能，加深对驻波及振动合成等理论知识的理解。2．学习用共振干涉法、相位比较法和时差法测定超声波的传播速度。3．通过用时差法对多种介质的测量，了解声纳技术的原理及其重要的
声速测定实验报告 本文内容：
实验序号：28
实验题目：声速测定
试验时间：2011·11·8
实验室：
成绩：
班级：
姓名：
学号：
指导教师
【实验目的】
1．了解压电换能器的功能，加深对驻波及振动合成等理论知识的理解。
2．学习用共振干涉法、相位比较法和时差法测定超声波的传播速度。
3．通过用时差法对多种介质的测量，了解声纳技术的原理及其重要的实用意义。
【实验原理】
在波动过程中波速、波长和频率之间存在着下列关系：，实验中可通过测定声波的波长和频率来求得声速。常用的方法有共振干涉法与相位比较法。
声波传播的距离与传播的时间存在下列关系：
，只要测出和就可测出声波传播的速度，这就是时差法测量声速的原理。
1．共振干涉法（驻波法）测量声速的原理：
当二束幅度相同，方向相反的声波相交时，产生干涉现象，出现驻波。对于波束1：、波束2：，当它们相交会时，叠加后的波形成波束3：，这里为声波的角频率，为经过的时间，为经过的距离。由此可见，叠加后的声波幅度，随距离按变化。如图28.1所示。
压电陶瓷换能器作为声波发射器，它由信号源供给频率为数千周的交流电信号，由逆压电效应发出一平面超声波；而换能器则作为声波的接收器，正压电效应将接收到的声压转换成电信号，该信号输入示波器，我们在示波器上可看到一组由声压信号产生的正弦波形。声源发出的声波，经介质传播到，在接收声波信号的同时反射部分声波信号，如果接收面（）与发射面（）严格平行，入射波即在接收面上垂直反射，入射波与发射波相干涉形成驻波。我们在示波器上观察到的实际上是这两个相干波合成后在声波接收器处的振动情况。移动位置（即改变与之间的距离），你从示波器显示上会发现当在某些位置时振幅有最小值或最大值。根据波的干涉理论可以知道：任何二相邻的振幅最大值的位置之间（或二相邻的振幅最小值的位置之间）的距离均为。为测量声波的波长，可以在一边观察示波器上声压振幅值的同时，缓
图
28.1
共振干涉法原理图
慢的改变和之间的距离。示波器上就可以看到声振动幅值不断地由最大变到最小再变到最大，二相邻的振幅最大之间移动过的距离亦为。超声换能器至之间的距离的改变可通过转动螺杆的鼓轮来实现，而超声波的频率又可由声波测试仪信号源频率显示窗口直接读出。在连续多次测量相隔半波长的的位置变化及声波频率以后，我们可运用测量数据计算出声速，用逐差法处理测量的数据。
2．相位法测量原理
声源发出声波后，在其周围形成声场，声场在介质中任一点的振动相位是随时间而变化的。但它和声源的振动相位差不随时间变化。
设声源方程为：
距声源处接收到的振动为：
两处振动的相位差：
当把和的信号分别输入到示波器轴和轴，那么当即时，合振动为一斜率为正的直线，当，即时，合振动为一斜率为负的直线，当为其它值时，合成振动为椭圆（如图28.2）。
图28.2
接收信号与发射信号形成李萨如图
3．时差法测量原理
以上二种方法测声速，是用示波器观察波谷和波峰，或观察二个波的相位差，原理是正确的，但存在读数误差。较精确测量声速的方法是采用声波时差法，时差法在工程中得到了广泛的应用。它是将经脉冲调制的电信号加到发射换能器上，声波在介质中传播，经过时间后，到达距离为处的接收换能器，那么可以用以下公式求出声波在介质中传播的速度，速度为
。
图28.3
相位法原理图
【实验仪器】
实验仪器采用杭州精科仪器有限公司生产的型声速测量组合仪及型声速测定专用信号源各一台，其外形结构见图28.4。
图28.4
SV6型声速测量组合仪实物照片
组合仪主要由储液槽、传动机构、数显标尺、两副压电换能器等组成。储液槽中的压电换能器供测量液体声速用，另一副换能器供测量空气及固体声速用。作为发射超声波用的换能器
固定在储液槽的左边，另一只接收超声波用的接收换能器装在可移动滑块上。上下两只换能器的相对位移通过传动机构同步行进，并由数显表头显示位移的距离。
发射换能器超声波的正弦电压信号由声速测定专用信号源供给，换能器把接收到的超声波声压转换成电压信号，用示波器观察；时差法测量时则还要接到专用信号源进行时间测量，测得的时间值具有保持功能。
实验时用户需自备示波器一台；游标卡尺一把，用于测量固体棒的长度。
图28.5
共振干涉法、相位法（上）、时差法（下）测量连线图
【实验内容】
1.
声速测量系统的连接
声速测量时，专用信号源、测试仪、示波器之间，连接方法见图28.5。
2.
谐振频率的调节
根据测量要求初步调节好示波器。将专用信号源输出的正弦信号频率调节到换能器的谐振频率，以使换能器发射出较强的超声波，能较好地进行声能与电能的相互转换，以得到较好的实验效果，方法如下：
（1）将专用信号源的“发射波形”端接至示波器，调节示波器，能清楚地观察到同步的正弦波信号；
（2）专用信号源的上“发射强度”旋钮，使其输出电压在左右，然后将换能器的接收信号接至示波器，调整信号频率，观察接收波的电压幅度变化，在某一频率点处（之间，因不同的换能器或介质而异）电压幅度最大，此频率即是压电换能器、相匹配频率点，记录此频率
。
（3）改变、的距离，使示波器的正弦波振幅最大，再次调节正弦信号频率，直至示波器显示的正弦波振幅达到最大值。共测次取平均频率。
3.
共振干涉法、相位法、时差法测量声速的步骤
（1）共振干涉法（驻波法）测量波长
将测试方法设置到连续方式。按前面实验内容二的方法，确定最佳工作频率。观察示波器，找到接收波形的最大值，记录幅度为最大时的距离，由数显尺上直接读出或在机械刻度上读出；记下位置
。然后，向着同方向转动距离调节鼓轮，这时波形的幅度会发生变化（同时在示波器上可以观察到来自接收换能器的振动曲线波形发生相移），逐个记下振幅最大的，，…共10个点，单次测量的波长
。用逐差法处理这十个数据，即可得到波长
。
（2）相位比较法（李萨如图法）测量波长
将测试方法设置到连续波方式。确定最佳工作频率，单踪示波器接收波接到“”，发射波接到“”外触发端；双踪示波器接收波接到“”，发射波接到“”，打到“”
显示方式，适当调节示波器，出现李萨如图形。转动距离调节鼓轮，观察波形为一定角度的斜线，记下的位置，再向前或者向后（必须是一个方向）移动距离，使观察到的波形又回到前面所说的特定角度的斜线，这时来自接收换能器的振动波形发生了相移。依次记下示波器屏上斜率负、正变化的直线出现的对应位置，，…。单次波长
。多次测定用逐差法处理数据，即可得到波长。
3）时差法测量声速
①
空气介质
测量空气声速时,将专用信号源上“声速传播介质”置于“空气”位置,发射换能器（带有转轴）用紧定螺钉固定，然后将话筒插头插入接线盒中的插座中。
将测试方法设置到脉冲波方式。将和之间的距离调到一定距离（≥）。开启数显表头电源，并置，再调节接收增益，使示波器上显示的接收波信号幅度在左右（峰-峰值），以使计时器工作在最佳状态。然后记录此时的距离值和显示的时间值、
(时间由声速测试仪信号源时间显示窗口直接读出)；移动，记录下这时的距离值和显示的时间值、。则声速
。记录介质温度。
需要说明的是，由于声波的衰减，移动换能器使测量距离变大（这时时间也变大）时，如果测量时间值出现跳变，则应顺时针方向微调“接收放大”旋钮，以补偿信号的衰减；反之测量距离变小时，如果测量时间值出现跳变，则应逆时针方向微调“接收放大”旋钮，以使计时器能正确计时。
②
液体介质
当使用液体为介质测试声速时，先小心将金属测试架从储液槽中取出，取出时应用手指稍稍抵住储液槽，再向上取出金属测试架。然后向储液槽注入液体，直至液面线处，但不要超过液面线。注意：在注入液体时，不能将液体淋在数显表头上，然后将金属测试架装回储液槽。
专用信号源上“声速传播介质”置于“液体”位置，换能器的连接线接至测试架上的“液体”专用插座上，即可进行测试，步骤与1相同。记录介质温度
。
③
固体介质：(只适合用时差法测量)
测量非金属（有机玻璃棒）、金属（黄铜棒）固体介质时，可按以下步骤进行实验：
a.将专用信号源上的“测试方法”置于“脉冲波”位置，“声速传播介质”按测试材质的不同，置于“非金属”或“金属”位置。
b.先拔出发射换能器尾部的连接插头，再将待测的测试棒的一端面小螺柱旋入接收换能器中心螺孔内，再将另一端面的小螺柱旋入能旋转的发射换能器上，使固体棒的两端面与两换能器的平面可靠、紧密接触，注意：旋紧时，应用力均匀，不要用力过猛，以免损坏螺纹，拧紧程度要求两只换能器端面与被测棒两端紧密接触即可。调换测试棒时，应先拔出发射换能器尾部的连接插头，然后旋出发射换能器的一端，再旋出接收换能器的一端。
c.把发射换能器尾部的连接插头插入接线盒的插座中，按图28.接线，即可开始测量。
d.记录信号源的时间读数，单位为。测试棒的长度可用游标卡尺测量得到并记录。
e.用以上方法调换第二长度及第三长度被测棒，重新测量并记录数据。
f.用逐差法处理数据，根据不同被测棒的长度差和测得的时间差计算出被测棒的声速。
【数据处理】
1.共振平率：36.9KHz
驻波法-空气介质
编号
1
2
3
4
5
振幅最大点（mm）
66.78
71.35
75.91
80.61
85.21
6
7
8
9
10
89.79
94.48
99.22
103.68
108.43
水介质
编号
1
2
3
4
5
振幅最大点（mm）
84.26
106.83
127.09
149.01
170.77
6
7
8
9
10
193.97
216.41
230.24
239.48
247.25
李萨如图法-空气介质
编号
1
2
3
4
5
图形重合点（mm）
62.78
72.11
81.83
90.89
100.19
6
7
8
9
10
109.76
119.13
128.38
137.51
146.31
水介质
编号
1
2
3
4
5
图形重合点（mm）
18.90
62.4
99.10
141.78
184.08
6
7
8
9
10
229.06
272.08
314.08
355.08
395.43
2．以空气介质为例，计算出共振干涉法和相位法测得的波长平均值，及其标准偏差，同时考虑仪器的示值读数误差为。经计算可得波长的测量结果。
干涉法
空气介质：=2*【（89.79-66.78）+（94.48-71.45）+（99.22-75.91）+（103.68-80.61）+（108.43-85.21）】/25=9.26mm
考虑仪器读数误差和标准偏差，
相位法
空气介质：=[(109.76-62.78)+(119.13-72.11)+(128.38-81.83)+(137.51-90.89)+(146.31-100.19)]/25=9.33mm
考虑仪器读数误差和标准偏差，
3．按理论值公式
，算出理论值
。
式中为时的声速，。
t=15℃
4．计算出通过二种方法测量的以及值，其中
。
将实验结果与理论值比较，计算百分比误差。分析误差产生的原因。可写为在室温
为
15
时，用共振干涉法（相位法）测得超声波在空气中的传播速度为：
（驻波法）
（相位法）
5．列表记录用时差法测量非金属棒及金属棒的实验数据。
（1）
三根相同材质，但不同长度待测棒的长度
金属
棒长度（mm）
时间（μs）
声速（m/s）
L1
167
76
2197.4
L2
208
87
2390.8
L3
247
99
2494.9
非金属
棒长度(mm0
时间（μs）
声速（m/s）
L1
180
108
1666.7
L2
220
137
1605.8
【思考题】
1．
声速测量中共振干涉法、相位法、时差法有何异同？
从波源上说，干涉法、相位法用的是连续波，时差法用的是脉冲波。从测量仪器上说，干涉法、相位法要用示波器、刻尺和频率计，时差法用的是计时仪器和刻尺。从原理上说，干涉法、相位法原理相同，均是发射波和返回波形成驻波（在力学里对应的称共振），测量波腹到波腹之间的距离或驻波相位差为2Pi（两个波腹到波腹之间的距离）距离来计算波速（波腹到波腹之间的距离为声波长的1/2,用波长乘以频率既得声速），这种方法的优点是通过示波器观测波形直观，又可以讲解驻波和李萨如图形，涉及知识点较多，一般学校都会选择这两种方法做测量，缺点是波腹和相位差所对应的示波器波形判断人为因素太大，测量出来的数据偏差较大；时差法所用为脉冲波，可人为改变接收器到发射器的距离，测量脉冲发射到接收的时间差，用距离改变量除以时间改变量即可，优点是人为因素少，测量精度高，缺点（对于实验教学来说）涉及的内容少，操作太简单。
2．
为什么要在谐振频率条件下进行声速测量？如何调节和判断测量系统是否处于谐振状态？
谐振时超声波的发射和接收效率均达到最高；保持其他条件不变，仅仅改变信号发生器的输出频率，观察接收到得超声波信号幅度，出现极大值时对应的频率就是谐振频率。
3．
为什么发射换能器的发射面与接收换能器的接收面要保持互相平行？
发射换能器发送的能量是垂直发射面传播的，接受换能器接受的能量是垂直接受面接受的。如果不让两面的中心垂线对正，你的传送的能量就有损失。
4．声音在不同介质中传播有何区别？声速为什么会不同？
声音其实就是一种振动，在不同介质中传播其实就是不同介质在进行这种振动（因为声波传导这里会引起这种介质振动）。传播时声波频率不会变，变的是波长，也就是说声波在不同介质中传播有不同的波长。而声速是波长和频率的乘积，所以会有不同的声速。