蛋白质CD光谱定性解析_总结 本文关键词：光谱，定性，蛋白质，解析，CD
蛋白质CD光谱定性解析_总结 本文简介：蛋白质的圆二色性(1)由氨基酸通过肽键连接而成；(2)光学活性基团：肽键、芳香氨基酸残基、二硫桥键；(3)蛋白质有多个结构层次，相同的氨基酸序列，因蛋白质的折叠结构不同，基团的光学活性受到影响。蛋白质的圆二色特征(1)光学活性基团及折叠结构；(2)250nm以下的光谱区，肽键的电子跃迁引起；(3)2
蛋白质CD光谱定性解析_总结 本文内容：
蛋白质的圆二色性
(1)由氨基酸通过肽键连接而成；
(2)光学活性基团：肽键、芳香氨基酸残基、二硫桥键；
(3)蛋白质有多个结构层次，相同的氨基酸序列，因蛋白质的折叠结构不同，基团的光学活性受到影响。
蛋白质的圆二色特征
(1)光学活性基团及折叠结构；
(2)250nm以下的光谱区，肽键的电子跃迁引起；
(3)250~300nm光谱区，侧链芳香基团的电子跃迁引起；
(4)300~700nm光谱区，蛋白质辅基等外在生色基团引起。
蛋白质CD光谱的波长范围：远紫外区（185-245nm)、近紫外区（245-320nm)
分子构象
电子跃迁
形式
极值的波长
[θ]*103
Deg.cm2/dmol
α-螺旋
（α-helix）
n→π﹡
π→π﹡
221~222nm(-)
207~210nm(-)
191nm(+)
-38~-40
-36~-40
72~86
β-折叠
（β-sheet）
n→π﹡
π→π﹡
217~218nm(-)
195~197nm(+)
-19~-21
28~42
β-转角
（β-turn）
n→π﹡
π→π﹡
227nm(-)
弱
200~205nm(+)
192.5(-)强
无规卷曲
(random
coil)
π→π﹡
230nm(-)
215~218nm
（+）
195~202nm(-)强
-1.6
1~2
-25~-50
圆二色谱法分析多肽二级结构
圆二色谱是一种特殊的吸收谱，它通过测量蛋白质等生物大分子的圆二色光谱，从而得到生物大分子的二级结构，简单、快捷，广泛应用在蛋白质折叠，蛋白质构象研究，酶动力学等领域。
圆二色谱紫外区段（190-240nm），主要生色团是肽链，这一波长范围的CD谱包含了生物大分子主链构象的信息。α-螺旋构象的CD谱在222nm、208nm处呈负峰，在190nm附近有一正峰。β-折叠构象的CD谱，在217-218nm处有一负峰，在195-198nm处有一强的正峰。无规则卷曲构象的CD谱在198nm附近有一负峰，在220nm附近有一小而宽的正峰。
蛋白浓度与使用的光径厚度和测量区域有一定关系，对于测量远紫外区德氨基酸残基微环境的蛋白而言，浓度范围在0.1~1.0mg/ml，则光径可选择在0.1~0.2cm之间，溶液体积则在200~500ul。而测量近紫外区的蛋白质三级结构，所需浓度要至少比远紫外区的浓10倍方能检测到有效信号，且一般光径的选择均在0.2~1.0cm，相应的体积也需增加至1~2mL
缓冲液可选50~100mmol
trs-HCl、PBS等，尽量除去EDTA。
远紫外
近紫外
二硫键一般都是不对称的，它在圆二色性光谱上，于195-200nm和250-260处有谱峰
色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸残基的侧链其谱峰在230-310nm之间，色氨酸残基侧链的谱峰一般集中在290-
310nm之间，但有时也会向短波长方向移动从而与酪氨酸残基侧链的谱峰重叠
在250-260nm之间，苯环的谱峰又与二流键的谱峰重叠